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摘要　　应用AdMax腺病毒载体系统构建携带siSPK1基因的重组腺病毒， 进一步研究SPK1基因对N2a细胞凋亡的影响。 设计可形成小发夹结构的SPK1-siRNA模板cDNA序列， 克隆至质粒pDC316-siRNA， 构建SPK1-siRNA穿梭质粒pDC316-SPK1， 经鉴定正确后， 将pDC316-SPK1与辅助包装质粒(pBHG lox ΔE1，3 Cre)共转染至HEK293细胞， 包装纯化并扩增重组腺病毒颗粒， 终点稀释法测定病毒滴度; 病毒感染N2a细胞， Western blot法检测SPK1蛋白的表达; Hoechst33258染色检测SPK1基因对N2a细胞凋亡的影响。酶切后PCR分析、测序鉴定表明， pDC316-SPK1构建成功， 病毒纯化后滴度为2.50E+10 PFU/mL; 重组病毒可在蛋白水平抑制SPK1的表达; SPK1基因抑制后， N2a细胞凋亡增加(P<0.001)。上述结果表明， 含有SPK1-siRNA的重组腺病毒构建成功， 且具有抑制SPK1蛋白表达的功能， 该基因沉默后， N2a细胞凋亡增加。