基于小鼠MMP-9基因的siRNA的筛选

 通过GenBank数据库检索, 基于小鼠MMP-9基因设计特异性的siRNA干扰靶点, 克隆至pGCsi-U6/Neo/GFP载体中, 使用PEI衍生物包裹, 转染小鼠黑色素瘤B16细胞, 流式细胞仪和激光扫描共聚焦显微镜分析细胞转染情况, RT-PCR检测24, 48 h后MMP-9基因转录水平变化, 筛选最佳的重组质粒和干扰靶点。结果显示: 成功设计和构建了3个MMP-9-siRNA干扰质粒, 3个重组质粒对B16细胞的转染率分别为60.04%、63.93%和56.27%, 且3个重组质粒均能有效干扰B16细胞MMP-9 mRNA的表达, 其中MMP-9-siRNA-2干扰效率最高(63%), 可持续干扰MMP-9基因表达。这些结果提示, MMP-9-siRNA-2为沉默小鼠黑色素瘤细胞MMP-9基因最优的siRNA重组质粒。