生物技术服务

摘要　　真核翻译起始因子3的亚单位eIF3g在一些多药耐药肿瘤细胞中表达上调。背景相近而eIF3g表达有明显差异的肿瘤细胞模型的建立对阐明其作用及机制有重要意义。该研究利用四环素调控的Tet-On Advanced诱导表达系统, 分别构建了可诱导过表达外源性eIF3g和表达eIF3g人工microRNA的载体, 并包装为相应的慢病毒, 将慢病毒分别感染乳腺癌细胞Bcap37, 经400 μg/mL G418和0.4 μg/mL Puromycin筛选后, 分别获得稳定转染的乳癌细胞克隆Bcap37/Tet-On-eIF3g和Bcap37/Tet-On-eIF3gmiR。将这些细胞克隆分别在1 μg/mL DOX的作用下诱导培养72 h, 用Western blot检测eIF3g的表达。结果显示, Bcap37/Tet-On-eIF3g中eIF3g表达明显增加,Bcap37/Tet-OneIF3gmiR中eIF3g表达抑制明显。该工作成功建立了可诱导外源性eIF3g过表达和抑制内源性eIF3g表达的乳腺癌细胞模型, 为进一步的研究打下了基础。