液相色谱

1.柱子的填料问题

可考虑换成氨基柱或氰基柱

2.流动相的问题，可能在8％乙腈中的溶解度有问题，可加大有机项比例

1.       短吸收波长（220nm）处，具有吸收的干扰物质较多，所以干扰峰较多

2.       乙腈/水梯度洗脱时，重现性差，可考虑通过延长时间进行考察是否存在蓄积。

3.       可考虑增大流动相梯度提高分离效果。流动相的组成，可考虑添加 0.1%三乙胺改善峰形。

4.       是不是柱子由于使用时间太长，导致柱效降低，可考虑更换新色谱柱或其他品牌的色谱柱，考察一下粒径、柱长等方面的影响。

5.       大进样量可能会导致系统饱和，从而出现鬼峰。

6.       可尝试采用LC-MS，选择离子对色谱，以及高效毛细管电泳等方法进行分离。

可换根柱子试试，此外，不知具体进样量有多大，如果进样量太大，饱和了，当然峰变宽而不是变高。具体情况不清楚，不好说。

建议尝试将AB两相分别配制成2%和8%的乙腈水溶液之后进行梯度分离，保证流动相条件的重复性之后再优化。

把从柱子到检测器的管路口径换小试试，换高灵敏度检测器试试。进样量不要太多。以免拥堵。

分离该类化合物是否应该选用极性强一点的色谱柱

建议
1，采用正相色谱。
2，若分离效果不好，选择性不强也可衍生化后再色谱分离。
3，杂质峰太多的话，可考虑样品的前处理是否有问题。

问题叙述不太清楚。

1、建议使用Phenyl-hexyl(Phenomenex)的柱子试一试。

2、重现性差，请检查是否与样品中含有其他大分子有关，是否有蛋白等存在？另外，由于采用了梯度程序，所以两次分离过程间，应定要有至少20分钟的柱平衡时间，用0时刻的流动相组成来平衡柱子，然后才可以进行下一次的分析。

但愿这些会有所帮助。

楼主：HPLC分析没有化合物结构，即便是懂这方面分析的专家都无法给出全面建设性意见，望尽量将问题的条件表述完整，以便大家更快的帮您解决问题！

采用普通反相HPLC分量氨基酸的难度比较大，建议采用毛细管电泳或离子色谱。