【求助】2-DE：为什么同样的条件跑出不一样的图？ - 经验共享

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标题:【求助】2-DE：为什么同样的条件跑出不一样的图？

yonger[使用道具]
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发表于 2013-12-19 15:58 资料个人空间短消息加为好友

小中大

另外，后两张图的上样量可以适当增加一些，当然，增加了上样量之后，高压聚焦时间也要适当增加！

yjf1026[使用道具]
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发表于 2013-12-19 15:58 资料个人空间短消息加为好友

小中大

第二幅图好象有气泡造成的拖尾现象,另外胶条在平衡完后不立即跑可以放在电泳缓冲液里浸泡,对结果影响不大,或者封胶放置几个小时影响也不大,我曾见过有人封胶完忘记开电泳仪了,放了一中午最后图还是很不错的
感觉你后面的图点太少了所以没法评论别的问题,你先加大上样量,另外在DTT和IAA里面的平衡时间减少到10-15分钟试试

8princess8[使用道具]
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发表于 2013-12-19 15:59 资料个人空间短消息加为好友

小中大

从上面的信息是很难回答什么啊。
你的这两个样品有没有进行过1D电泳？跑完后用考马斯亮蓝染色看看，是不是样品在制备的过程中出现了这么大的差别？
还有就是胶条有没有问题？
就这么一次的结果是这样子的吗？重复了没有啊？呵呵，2D电泳的步骤比较多，由于操作的原因可能你自己还没有意识到。
2D的重复性不好，但也没有离谱到这个程度啊。

==========================

同意你的观点
也有可能楼主换了试剂和药品
也有可能操作问题

dongdongqiang[使用道具]
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发表于 2013-12-19 16:00 资料个人空间短消息加为好友

小中大

谢谢各位指点。我以前上样量是1mg，下次打算用2mg。上周又出现了一错误，在水化液中多加了2.5微升biolyte，结果一向聚焦电压到4000伏（17cm胶条）就上不去了，染色后图像如下，考虑酸性短蛋白还跑开一些，后面就集中成一条竖线了。今天用同样的步骤聚焦就很顺利。一滴电解质的影响就这么大呀！非常惭愧！！

附件

2013-12-19 16:00

32113708.snap.jpg (20.92 KB)

rxcc33[使用道具]
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发表于 2013-12-19 16:00 资料个人空间短消息加为好友

小中大

你是用银染的吗？用什么拍的照片？

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