表观遗传学

1. 秋水仙素是防垂体抑制剂.一般最终浓度每瓶0.07Lg,作用时间2.5~3h,一般秋水仙素溶液的浓度与处理时间有一定的关系.如果秋水仙素的浓度过高或处理的时间过长,结果标本中的分裂细胞虽多,但染色体过于浓缩,以致细胞形态特征模糊,难以进行分析.相反,如果秋水仙素的浓度过低或处理的时间过短,则标本中的分裂细胞就少.

2. 0.075mol/LKCl溶液用于处理中期细胞,使细胞核膨胀破裂,染色体分散良好而便于观察计数，0.075mol/LKCl溶液做低渗液,当低渗处理时间过长时,细胞膜往往过早破裂,导致分裂细胞丢失,或染色体丢失;如果低渗处理时间不足时细胞膨胀不够,则染色体分散不佳,难以进行染色体计数分析.低渗时间最好30~50min,经过低渗处理的细胞因已膨胀,容易过早破裂,造成分裂细胞丢失,所以低渗后操作应特别注意不要用力冲吸.

3. 如果固定液不新鲜或甲醇!冰醋酸的质量不佳时,染色体形象模糊染色体周围有胞浆背景.所以固定液应现用现配,为分析纯的甲醇和冰醋酸按3：1的比例配制.

4. 如果冰片冷冻不够,细胞难以贴附而造成丢失.载玻片经过一系列处理擦干后,放置冰箱内,冰冻4小时以上,既即为冰片.滴片时现用现拿出,否则会融化.

不知道楼主的实验材料是什么？结果好吗？分裂相多吗？染色体形态怎么样？

近期也在做染色体，75mM KCl低渗，偶的效果很不好。分裂相不多，看片子时看到的都是没摔破的细胞。



楼主说载玻片经过一系列处理后放入冰箱冷冻4小时以上。能详细说下怎么处理的吗？

摔片子时要有一定高度，最好站桌子上瞄准（有点搞笑，但很实用），滴下后迅速吹散并过酒精灯焰两三次即可。这样分散的很开。

楼主做过鱼的染色体铺片吗？介绍点经验吧

不搞笑！小妹每次滴片也是爬上爬下的！ 不过现在偶改成把片子放在地上，高举双手滴片了～～～

为什么要过酒精灯呢？

我们主要做羊水、脐血、外周血的染色体，试验材料都差不多，培养基就是1640+血清+PHA、F10+血清，每次做出来结果都还可以，分裂相也不错。G显带后基本上都是高分辨的。我们用的低渗液和你的一样啊，低渗时间37度，20min（脐血和外周血）然后预固定离心。羊水的低渗时间要少些，只需要5min就可以了，低渗液是0.4％的氯化钾和0.4％枸橼酸钠，效果非常的错。 一般羊水的成功率在98-99％之间。

玻片主要是要防止上面有油，如果有油，嘀片的时候染色体分散会不好，所以玻片要先加洗洁剂100度煮30min，然后用纱布一张一张的擦，直到上面没有油为止，（虽然繁琐，但是为了得到好的染色体也没有办法了）然后清水冲洗干净，然后泡酸。使用时在取出用蒸馏水冲洗干净，置于干净的蒸馏水中，4度放置4小时左右，然后使用。

嘀片的时候一般嘀3-5嘀就可以了，不能太多，多了就会流出去，染色体就没有了，一般不用吹，让它自己散开，然后酒精灯上来回2-3次就可以了。然后烤片，准备分带。（注意：嘀片的时候不能太高了，要是那样，染色体都打飞了，而且会很分散，计数的时候会不好计数。一般1-3cm就可以了，如果是羊水还有更低）

个人经验，仅供参考。

不好意思，这个我没有做过了，我主要做人的染色体。

楼主能不能贴几张染色体照片呢？我最近显带总是不太理想，我想请问您那里G显带与天气、气候有关吗？

我们都是当天做了就显带的啊，没有选择什么时间啊！

下图外周血培养72小时后制片G显带，大家多多指教！

下图是羊水培养11天后制片G显带，多多指教谢谢！