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标题:【求助】IDA型Ni柱填料的使用问题

remonte[使用道具]
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发表于 2013-12-25 16:03 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】IDA型Ni柱填料的使用问题

大家好：
请问配基为IDA的Ni琼脂糖凝胶可以用来纯化包涵体样品吗？如果样品是包涵体，平衡缓冲液及洗脱缓冲液都应加8M尿素以使包涵体变性，尿素是还原剂，这样会不会对IDA的Ni琼脂糖凝胶有影响？查阅相关资料知：配基为IDA的Ni琼脂糖凝胶填料不如配基为NTA的Ni琼脂糖凝胶稳定性好，但配基为NTA的Ni琼脂糖凝胶有买不到？用IDA的行吗？不知大家有什么高见？谢谢各位帮我答疑解惑！！
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fox_79[使用道具]
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发表于 2013-12-25 16:05 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

1、IDA的Ni琼脂糖凝胶可以用来纯化包涵体样品，肯定可以。
2、尿素是变性剂，不是还原剂，没有任何还原作用。
3、配基为IDA的Ni琼脂糖凝胶填料与配基为NTA的Ni琼脂糖凝胶在稳定性方面没有明显的差别。我个人更喜欢用IDA型的，再生方便。
4、NTA型的优势在于可以耐还原剂。
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remonte[使用道具]
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发表于 2013-12-25 16:15 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


QUOTE:
原帖由 fox_79 于 2013-12-25 16:05 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

1、IDA的Ni琼脂糖凝胶可以用来纯化包涵体样品，肯定可以。
2、尿素是变性剂，不是还原剂，没有任何还原作用。
3、配基为IDA的Ni琼脂糖凝胶填料与配基为NTA的Ni琼脂糖凝胶在稳定性方面没有明显的差别。我个人更喜欢用IDA型 ...

IDA的好像比NTA的便宜，请问您用过Amersham的填料吗？效果怎么样？
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eve_49[使用道具]
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发表于 2013-12-25 16:16 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


QUOTE:
原帖由 fox_79 于 2013-12-25 16:05 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

1、IDA的Ni琼脂糖凝胶可以用来纯化包涵体样品，肯定可以。
2、尿素是变性剂，不是还原剂，没有任何还原作用。
3、配基为IDA的Ni琼脂糖凝胶填料与配基为NTA的Ni琼脂糖凝胶在稳定性方面没有明显的差别。我个人更喜欢用IDA型 ...

稍微修正一下第3点，NTA的配基稳定性确实比IDA要好，表现在实际操作中，就是更耐还原剂和EDTA，还有就是重复使用次数，不过IDA的载量相对比NTA高。
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yueban-1147[使用道具]
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发表于 2013-12-25 16:19 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
IDA的好像比NTA的便宜，请问您用过Amersham的填料吗？效果怎么样？

==============================================================================================================

是的，IDA的比NTA的要便宜好多。
我所使用的填料80%以上都是Amersham（现在叫GE Healthcare）。
并非说它真的比其它公司的填料好多少，而是它进入这个领域早，占了先机，技术资料丰富，长期以来的使用习惯使然。
我对它的填料性质很熟悉，那么当我再开发新的蛋白纯化工艺时，自然就会先用它的填料来试验，这样我心中有数，亦可节省时间。除非它的填料达不到我的要求，我才会去找其它公司的填料来试验。
GE填料的价格比较高，好在是可重复性使用的，而且花的也不是我的钱，所以一直就这么用了。其实有些国产的填料也不错，但对我要改纯化填料的话，涉及到的公司各个层面很繁琐，纯化成本在其中占的比重很小，不值得去做。
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发表于 2013-12-25 16:19 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
稍微修正一下第3点，NTA的配基稳定性确实比IDA要好，表现在实际操作中，就是更耐还原剂和EDTA，还有就是重复使用次数，不过IDA的载量相对比NTA高。

======================================================================================

你所说的实际操作表现我完全赞同。
但配基稳定性是否应该指配基和基质之间的连接稳定性，而不是指Ni的稳定性，通俗的讲，就是配基不容易脱落？
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发表于 2013-12-25 16:21 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


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原帖由 yueban-1147 于 2013-12-25 16:19 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
稍微修正一下第3点，NTA的配基稳定性确实比IDA要好，表现在实际操作中，就是更耐还原剂和EDTA，还有就是重复使用次数，不过IDA的载量相对比NTA高。

======================================================================= ...


Ni容不容易脱落，和IDA和NTA的结合有关系，原理上讲 NTA 结合NI牢固。
其他至于LINKER 什么的牢固程度也影响 填料的重复使用
填料这个东西 比较复杂，CHROMATOGRAPHY兄对这个比较专业
最权威的说法还是让他来解说
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发表于 2013-12-25 16:21 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

可以如此理解这2种填料的差别
NTA，IDA都有5个触手，NTA是3个和填料基质偶联，2个来结合蛋白，而IDA则恰恰相反，2个和和填料基质偶联，3个来结合蛋白.
所以，NTA不容易出现NI脱落，但载量不如IDA的高
我个人的观点是，只要不是蛋白挂柱有问题，尽量选择NTA的
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发表于 2013-12-25 16:22 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


QUOTE:
原帖由 ending 于 2013-12-25 16:21 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

可以如此理解这2种填料的差别
NTA，IDA都有5个触手，NTA是3个和填料基质偶联，2个来结合蛋白，而IDA则恰恰相反，2个和和填料基质偶联，3个来结合蛋白.
所以，NTA不容易出现NI脱落，但载量不如IDA的高
我个人的观点是，只要不是蛋白挂 ...

讲的形象，但是理解有误。
是Ni有5个结合位点。
见下帖，大家讨论过的。
【求助】纯化his-tag蛋白的镍柱可以永久性再生吗
cuturl('http://www.dxy.cn/bbs/thread/15270104')
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发表于 2013-12-25 16:23 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

NTA结合的Ni离子的量的确不如IDA的结合量，但是从我们做实验的情况看，NTA结合Ni的量控制在20umol/ml，而IDA结合Ni的量可以控制在15-120umol/ml，通常用的最得多的是40umol/mol,但是IDA（40umol/ml）和NTA（20umol/ml）结合蛋白的量没什么明显的差距。
我们研究所去年刚拿了一个生产高分辨率琼脂糖凝胶球的国际专利，转给GE公司了。同时，我们这个技术（膜乳化技术）也获得了2009年的国家技术发明二等奖。各位仁兄可以参考一下，国内的有些技术并不比国外的差。
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