蛋白质与蛋白组学 » 讨论区 » 经验共享 » 【求助】IDA型Ni柱填料的使用问题

采购询价

点击提交代表您同意 《用户服务协议》 《隐私政策》

 13  2/2 ‹‹12
 
需要登录并加入本群才可以回复和发新贴
打印 | 推荐 | 订阅 | 收藏

标题:【求助】IDA型Ni柱填料的使用问题

greenbee[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 79370
精华 0
积分 710
帖子 1119
信誉分 100
可用分 6368
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-12-10
状态 离线
11

发表于 2013-12-25 16:24 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

NTA无论怎么做都难做到载量大于IDA，何况成本在哪里，市场有的NTA我怀疑是假的,因为它真的配基是很贵的,除非自己合成,但是我想这也不是很容易的事情,当然对一些作用力很弱的蛋白也许看不出NTA和IDA的区别,但是NTA作用力弱于IDA,配基密度又不如,我看客户做的镍NTA和最好的NTA差不多,但是这样的填料和普通的IDA镍琼脂糖凝胶载量差很多,所以NTA特异性是以牺牲载量为代价的.此外如果对本身作用力弱的蛋白,有时候NTA挂不上,所以选择什么关键看自己的习惯.此外镍离子有六个螯合价位,通常NTA螯合4个,IDA螯合三个,所以各有2和3个结合位点.至于重复使用这两我不是很清楚,但是我知道有个客户最高用IDA镍琼脂糖凝胶做过300次.至于还原剂通常并不需要用那么高的浓度,而且大多蛋白不推荐加还原剂,除非不得已.即使1-2mM也足够了,因为蛋白浓度没那么高,自然不需要那么高浓度的还原剂.
琼脂糖凝胶能偶联的配基并非越多越好,即使多了,那载量也不能按比例提高,它已经差不多到极限,除非在它结构或孔径上做文章,否则难有突破.
顶部
49888[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 77494
精华 0
积分 776
帖子 1211
信誉分 100
可用分 6906
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-17
状态 离线
12

发表于 2013-12-25 16:24 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
NTA结合的Ni离子的量的确不如IDA的结合量，但是从我们做实验的情况看，NTA结合Ni的量控制在20umol/ml，而IDA结合Ni的量可以控制在15-120umol/ml，通常用的最得多的是40umol/mol,但是IDA（40umol/ml）和NTA（20umol/ml）结合蛋白的量没什么明显的差距。
我们研究所去年刚拿了一个生产高分辨率琼脂糖凝胶球的国际专利，转给GE公司了。同时，我们这个技术（膜乳化技术）也获得了2009年的国家技术发明二等奖。各位仁兄可以参考一下，国内的有些技术并不比国外的差。

================

这位是过程所的吧。
顶部
tuuu2[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 77597
精华 0
积分 507
帖子 674
信誉分 100
可用分 4211
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-18
状态 离线
13

发表于 2013-12-25 17:05 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

测是没有必要的，也没有方便、准确的方法能够测定。
但量的估计是必要的，以防柱过载，致使纯化条件误解。
22ml的Ni柱，IDA型的载量在100mg以上，NTA型的在50mg以上，根据纯化条件和蛋白类型而变化。
最好做它一次过载的纯化，取不同点的透过液电泳来确定特定蛋白在特定条件下的柱载量。然后上样量确定为50%-70%。用过几次的柱载量会逐渐下降，再生后恢复。
顶部
 13  2/2 ‹‹12