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400ML菌液,OD600=0.5-0.6,加IPTG(终浓度0.5mM),22℃诱导12h,超声收集上清,取1ml非变性条件下纯化.
破菌缓冲液:50mM NaH2PO4,300mM NaCl,pH8.0,PMSF6微升
破菌方法:超声400W,4s工作,6s间隙,冰水浴,共300次
洗涤液:PBS
柱平衡液:pH8.0,50mM NaH2PO4,300mM NaCl,pH8.0
柱淋洗液:50mM NaH2PO4,300mM NaCl,20mM 咪唑,pH8.0,50mM 咪唑
100mM 咪唑250mM 咪唑500mM 咪唑,每个浓度10ml阶段洗脱
载体类型:BL21PlysS,6-His
敬请各位大师指点,再次感谢