小中大
就气泡的问题:
超声破碎的体积一般在10-20ml之间,你可把探头距离50ml离心管底部0.3-0.8cm,可在此范围内来调节,看超声的声音是否刺,以及是否有气泡,如果有的话一般是往下调点,在这范围内一般不会有气泡的;
还有就是在菌体重悬后,用移液器尽量把你重悬的液体表面的气泡吸走,以防在破碎过程中使的蛋白变性,以及增加破碎过程中气泡的产生;
还有就是破碎一定要在冰浴中,保持低温;
TritonX-100:
这个浓度是个范围啊,一般有些蛋白本来不溶,用去污剂处理后就溶了,这个看去污剂的浓度;但这个我不知道发文章时候,是否承认是可溶性表达;呵呵,我们一般不加去污剂,而且去污剂在蛋白纯化及活性等后续实验中是很麻烦的事,因为,透析等方法是不可能彻底去除去污剂的;
祝好运!