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标题:【求助】超声波破碎细菌+Triton-X-100

阿司匹林[使用道具]
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既然你的蛋白是包涵体表达,那么建议你在超声的时候,不要加TritonX-100,出现泡沫液不是你所说的蛋白变性,包涵体蛋白是没有活性的,所以不存在变性与否的说法。在复性之前,随便怎么整都行,关键是复性条件与方法的选择。
TritonX-100是引起泡沫的主要原因,它不是消泡剂,虽然是表面活性剂.你可以选择在洗涤包涵体的时候加入Triton
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阿司匹林[使用道具]
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请问我就是普通的破碎后提全蛋白 不是融合蛋白
有必要超声破碎么~?
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taoshengyijiu[使用道具]
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我也是遇到了上诉问题,我的也是包涵体表达,我看到的Triton X-100怎么说工作浓度是0.1%,我现在都搞不懂是0.1%还是1%?
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yonger[使用道具]
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最有可能的原因是超声溶液的体积太小,而超声探头太大,插入液面的深度不够。
与Triton的关系不大。破菌不用加Triton。
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tuuu2[使用道具]
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就气泡的问题:
超声破碎的体积一般在10-20ml之间,你可把探头距离50ml离心管底部0.3-0.8cm,可在此范围内来调节,看超声的声音是否刺,以及是否有气泡,如果有的话一般是往下调点,在这范围内一般不会有气泡的;
还有就是在菌体重悬后,用移液器尽量把你重悬的液体表面的气泡吸走,以防在破碎过程中使的蛋白变性,以及增加破碎过程中气泡的产生;
还有就是破碎一定要在冰浴中,保持低温;
TritonX-100:
这个浓度是个范围啊,一般有些蛋白本来不溶,用去污剂处理后就溶了,这个看去污剂的浓度;但这个我不知道发文章时候,是否承认是可溶性表达;呵呵,我们一般不加去污剂,而且去污剂在蛋白纯化及活性等后续实验中是很麻烦的事,因为,透析等方法是不可能彻底去除去污剂的;
祝好运!
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