流动相极性变了

看流动相比例是否正常

关于液相出峰提前一般来说跟柱效降低和环境温度有关，可以进一步验证。

一般泵压及流速的改变不会影响出峰顺序，既然保留时间大大提前的同时出峰顺序发生改变，估计是与固定相、流动相组成、温度等变化有关。可以按相关方法分别检查后再分析看有无改善。

很可能是流动相的pH或配比问题。建议重新配一个试试！

柱子引起这一现象的可能性较小，可能是流动相比例的改变造成的极性溶剂比例增大，色谱峰提前，建议检查高压泵以及各个通道是否吸液正常，重点检查比例阀和密封圈。

出峰时间和流动相的比例、柱子、温度等都有关系。你的出峰时间可能与气温有关，化合物出峰次序和柱子有关。

影响色谱峰保留时间的因素很多，主要有色谱柱的型号、长短、柱温，流动相的比例、pH值等。根据网友提供的信息，希望他（她）在新色谱柱型号、柱温与过去一致的前提下，重点检查一下流动相中甲醇和水相配比的影响。因为所使用的流动相中甲醇仅占6%，有机相和水相悬殊太大，这种情况下甲醇量的稍微增加就会引起色谱峰保留时间的明显提前。建议重新配制流动相再试，有望能解决问题。

若色谱柱一直是反相，没有改正相，你的色谱峰提前，是不是你的流动相改变PH值了，影响的这三个化合物的电离。

1)柱型是否不同,即使相同柱子,不同时间填柱,填料活度不同,
2)不同时间配制溶剂如甲醇的含水量不同,
3)柱压或流速问题,
4)水的硬度问题

1、可能你的样品可能发生了变化。样品稳定性不够好的话会出现这样的问题。
2、 如果不考虑样品变质的话，柱温变化可能性很大。
3、 流动相用缓冲液时，如果走完样品后未把柱子冲洗干净，保留时间会提前。
4、 建议：把柱子用异丙醇冲洗一下试，冲柱子用过低的有机相比例会导致烷基链卷曲，再用的时候会使保留时间减短，然后用高有机相比例冲洗一段时间可恢复。