要么流动相配错了 要么柱子没平衡好

检查检查水相的滤头和单向阀

保留时间稳定吗？要是不稳定可能是比例阀出问题了

朋友，你说新换了柱子，反相柱的类型对吧？你的样品是新制备的还是原来的，建议你测一组以前样品的数据，比较一下！

如果仪器柱子没变，那你一定是重新配流动相了吧？是不是把甲醇：水=6：94，搞反了？极性完全相反，出峰顺序正好相反。

峰形好说明色谱柱没有问题，保留时间提前及出峰时间变化，可能的原因应该在流动相方面，我觉得应该看看下面两方面：
1、出峰时间提前，首先看流速是不是变化了，比如以前是1.0 mL/min，现在是0.6mL/min，不过因为糖精钠提前了，说明三种化合物的保留行为变化了，流速不会影响出峰的先后顺序，可能性较小，稍微留意一下就可以了。
2、最可能的就是流动相的组成变化了，色谱保留行为主要是色谱柱和流动相影响的，若色谱柱没变，应该是流动相变化了。我记得防腐剂的流动相是乙酸铵水溶液，乙酸铵起点离子对试剂和pH缓冲的作用，有助于苯甲酸、山梨酸、糖精钠在色谱柱的保留，即延长保留时间。若他们出峰时间提前了可能是乙酸铵没有加，或者乙酸铵的浓度变化了，也有可能是溶液的pH变化了。
如若上面的流动相条件没有变化，就该是色谱柱的问题，若是新柱子，看看色谱柱的型号、类型是不是和以前用的一样，不同厂家以及同一厂家不同型号的色谱柱对化合物的保留相差很大。若只能用这个柱子，建议改变流动相组成，把甲醇的比例改小，比如改为5:95或4:96。

主要应检查流动相批次或来源，确认流动相的组分、纯度无误．．．

没写清楚流动相是什么。如果其他条件没有变，有可能是配制的流动相发生了变化，比如配制时由于某些原因导致pH值与原来配制的pH值不同或者流动相放置时间过长。

这种情况可能原因：
1、是否更换了流动相。不是说流动相比例没变就没问题，而是说是否上次的试剂用完又换了一瓶新的？
2、色谱柱是否又重新平衡了？
3、标准溶液重新配了吗？
4、标准液被弄混了吗？
5、如果上述都不是的话，还有可能是柱头上的杂质被洗脱掉，或是柱上的杂质被洗脱掉，柱流速加快导致出峰速度加快；
6、如果所有条件都不变，那么可能是标准液给弄混了；
7、还有可能就是柱子使用的时间太长了，柱效严重降低，出现这种异常现象；
8、可以换根柱子试一试，保留时间是否还是原来的值，再重新配置新的标准液；

“不怕不会做，就怕比着做”hoho

可能的原因：
1. 柱子没有完全平衡好，有机相含量还比较高，导致保留时间提前，建议平衡时间长一点再试试。
2. 由于使用的流动相含水量较高（94%），导致C18固定相发生“疏水塌陷”，保留时间会大大提前，建议使用大量甲醇冲洗柱子以恢复C18的正常构象，然后再平衡到所需流动相条件试试保留时间是否重复；使用高含水量流动相分离极性物质最好使用极性C18固定相。
3. 色谱泵出现问题，导致水相含量偏低。