【求助】western中电泳速度超慢 - 经验共享

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标题:【求助】western中电泳速度超慢

glass[使用道具]
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发表于 2014-1-7 14:29 资料个人空间短消息加为好友

小中大

解决方案：
(1)跑电泳时，可以看看电流时多少，我们实验室经常回收用电泳液，只要电流在40-70，问题不大，否则要重新配电泳液
（2）你的电泳槽是不是容易漏；液面低于短板

tewank[使用道具]
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发表于 2014-1-7 14:30 资料个人空间短消息加为好友

小中大

我分离胶10%，浓缩胶5%

tewank[使用道具]
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发表于 2014-1-7 14:30 资料个人空间短消息加为好友

小中大

ph我试着调了一下，还是不行

tewank[使用道具]
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发表于 2014-1-7 14:31 资料个人空间短消息加为好友

小中大

恒流从来没用用过，电流大小跟蛋白有关吗？

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发表于 2014-1-7 14:32 资料个人空间短消息加为好友

小中大

其他都没问题的话，你看看是不是胶浓度有问题
大于15%的很难跑下去

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发表于 2014-1-7 14:33 资料个人空间短消息加为好友

小中大

电流大小和蛋白没有关系，分子量大的可以多跑一会儿，用marker看着就行。我一直用恒流，没有问题。你如果用恒压，随着快离子迁移结束，电流就下来了，电泳速度也就下来了。决定电泳的速度的因素之一是电流而不是电压，因此恒流更科学。

youyou99[使用道具]
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发表于 2014-1-7 14:33 资料个人空间短消息加为好友

小中大

最大的可能：电泳缓冲液！用新的吧！
我的储存液是5×的，每次跑电泳都现配1×
我用了1×的第二次就跑的很慢很慢，本来2个小时的事情给我拖到4.5个小时，试试吧或许有用~！

duoduo[使用道具]
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发表于 2014-1-7 14:34 资料个人空间短消息加为好友

小中大

我看是电泳槽卡玻板有问题，内外槽漏液。所以大部分的电流都没有通过你的胶层。
如果你加缓冲液是内外一样高的话，漏液也看不出来，但是电泳会跑的非常慢。

831226[使用道具]
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发表于 2014-1-7 14:34 资料个人空间短消息加为好友

小中大

电压小了，建议提高电压到150V。我一般使用手工配胶或者商业化的梯度胶，然后150V恒压跑1-1.5小时即可。

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