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标题:【求助】western难题

tianmei001[使用道具]
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发表于 2014-1-7 17:50 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】western难题


作了那么多的western，也算是一小手拉（自诩阿，不要笑话），最近遇到了非常奇怪的问题，
作了三个抗体，同样的样品，得出的条带一模一样，但是都不是目的带，而且变化趋势还是一样的，都有两条带，一强一弱，想了半天也不知为何。望赐教，感激不尽！
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junjie05[使用道具]
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发表于 2014-1-7 17:50 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
能否说明一下三个什么抗体，针对什么样品？
电泳图和WB图能发上来看看吗？
阴性、阳性对照有吗？
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tianmei001[使用道具]
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发表于 2014-1-7 17:50 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

三个都是santa的抗体，一个BCl2，另外两个也是调亡的抗体，没做对照，样品是小鼠的，电泳图没照，wb图片没扫描呢(扫描仪坏了)，但我用了western marker，杂交正常。
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tianmei001[使用道具]
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发表于 2014-1-7 17:51 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

这是其中一个抗体的，九个样品，最右边是marker。


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qqq111[使用道具]
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发表于 2014-1-7 17:51 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

怎么条带看着这么像抗体啊。marker分子量？
一抗是单抗还是多抗？
二抗种类？
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tianmei001[使用道具]
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发表于 2014-1-7 17:52 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

这张片子一抗是多抗，还有一个是单抗也是这样，二抗是HRP标记的羊抗兔的igg。marker从上往下120 85 60 40 22kda。
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tianmei001[使用道具]
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发表于 2014-1-7 17:52 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

为什么说像抗体呢？
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vcve[使用道具]
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发表于 2014-1-7 17:52 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

八成1抗没结合上，santa的抗体我实在不敢恭维，用过一次，效价很低，后来一律改用CST的了，从来没出过问题。个人觉得抗体上的钱省不得。
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qqq111[使用道具]
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发表于 2014-1-7 17:53 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

是条带和抗体的SDS-PAGE很像，包括距离和强弱。我一开始怀疑二抗和样品中的IgG有交叉，但根据你的分子量我的想法是错误的。
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tianmei001[使用道具]
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 小中大

bcl2的抗体我用过的，杂交别的样品是没问题的，但杂交这次的样品就现在这样。如果一抗美结合上又怎么会有条带呢？
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