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两个问题：1 楼主定量方法可能有问题，最明显的表观就是蛋白量少。
2.A-A 方法是有缺陷的，TCA 成酸性，注定了该方法比较适合偏碱性的蛋白（跟据蛋白提取的一些基本原理），楼上有说沉淀过夜，我并不赞同，长时间浸泡在酸性环境中，可能导致大量酸性蛋白的复溶困难，甚至最终复溶丢失。
对于TCA-A 方法 推荐不要放置时间过长，最好在4小时内，且放置在-20°条件下，期间每隔15-30 分钟，漩涡震荡一次，每次至少20秒。其后的操作流程和5楼相同，不过丙酮洗涤次数可以增加1-2次。
在者楼主 使用的是4-7 的胶条，其为酸性蛋白，点少也正常。
最终上样前 离心推荐40000G 一小时，效果明显会改善。
