小中大大家好。最近我做GST融合蛋白,做了几次表达不出来。
我的目的蛋白36K。连接的重组体已经测序,测序结果没有问题,也已经融合上。 可是,30度,用IPTG1mM诱导4小时,从SDS-PAGE结果看,只发现对照组有GST蛋白表达,重组质粒没有表达出目的融合蛋白。
希望各位高手指点下!!
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仅仅从SDS-PAGE就能判断你的融合蛋白没有表达?这个结论也下得太容易了,要知道,不是所有蛋白都能表达出一坨坨的。。。对照组仅仅是GST,所以表达量相对较高而已。为何不尝试亲和纯化后再跑电泳或者Western blot检测?
ps. 可以对融合基因进行测序,但是载体就不必测序了,劳民伤财,没有一点意义。