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标题:【求助】含8M尿素的样品能直接上样做SDS-PAGE吗？

3648755[使用道具]
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发表于 2014-1-9 11:33 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】含8M尿素的样品能直接上样做SDS-PAGE吗？


请教一个SDS-PAGE的问题，急求答案：含8M尿素的样品能直接上样做SDS-PAGE吗？8M尿素的pH应该是碱性的吧，对SDS-PAGE系统肯定会有影响是吧。请各位知道的兄弟姐妹帮帮忙！先谢谢了。
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wood533[使用道具]
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发表于 2014-1-9 11:33 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

没问题啊，要是盐酸胍就不行了
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eric930[使用道具]
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发表于 2014-1-9 11:33 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

可以的，盐酸胍的就需要处理一下再上样
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发表于 2014-1-9 11:34 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

哦，谢谢你们的解答，那加入尿素后不会影响SDS-PAGE的电泳系统的pH吗？用不用透析除去尿素？
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 小中大
电泳时样品不用透析，只是条带可能没有不含尿素的样品漂亮。
样品中的尿素不会影响到电泳体系的pH，因为电泳体系的缓冲能力很强，尿素的那一点弱碱性根本撼动不了体系pH。你看一看制胶、上样缓冲液的配方就明白了。
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发表于 2014-1-9 11:34 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
可以直接上样，我每次都是这么做的，没有任何影响
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发表于 2014-1-9 11:35 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
请教一个SDS-PAGE的问题，急求答案：含8M尿素的样品能直接上样做SDS-PAGE吗？8M尿素的pH应该是碱性的吧，对SDS-PAGE系统肯定会有影响是吧。请各位知道的兄弟姐妹帮帮忙！先谢谢了。

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直接跑没问题。
盐浓度高的会向低浓度的地方扩散，所以如果同时有多个样品条带，边上的会歪。（可以在两边各加1条同浓度的空白来压住你的8M的样品）
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yes4[使用道具]
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发表于 2014-1-9 11:36 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我近来跑的都是尿素变性样，完全不会影响！可能和跑胶系统也有关吧！我们实验室里用的是Tris-Tricine系统（缓冲液分阴阳极），而不是甘氨酸系统（只用一种缓冲液）！Tris-Tricine系统似乎对盐浓度等不太敏感。如果觉得甘氨酸系统跑得不好看的话，不妨换这种系统试试！
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3648755[使用道具]
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发表于 2014-1-9 11:36 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

哦，谢谢yes4的宝贵意见，我们实验室也是用的Tris-Tricine系统，只是没有跑尿素变性样，我的肽样不在实际位置，偏大了好多，在胶上显示很粗的带，我在想我的东西会不会在沉淀里，所以想加点尿素再跑一次试试，还没跑，等有了结果我再回来反馈呵
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MYX1234[使用道具]
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发表于 2022-3-20 14:06 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

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请问楼主 上样前加loadingbuffer 还需要煮沸吗
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