【求助】如何确定二硫键是否形成

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标题:【求助】如何确定二硫键是否形成

caihong[使用道具]
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发表于 2014-1-14 10:55 资料个人空间短消息加为好友

小中大

请问各位高手，我的蛋白只含一对二硫键，表达出来时没有形成二硫键的，我如何让它形成，并检测到已经形成了二硫键？

remonte[使用道具]
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发表于 2014-1-14 10:56 资料个人空间短消息加为好友

小中大

如果该蛋白是以包涵体形式表达的话，就无法形成其天然构象，二硫键可能被破坏。这就需要一个蛋白复性的过程，即使表达出的蛋白恢复其天然构想，复性后再对其进行蛋白结构与构象检测再与该蛋白的天然构象进行比较分析。
个人拙见

caihong[使用道具]
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发表于 2014-1-14 10:56 资料个人空间短消息加为好友

小中大

蛋白表达出来的时候是在上清的，只是没有形成二硫键，考虑到可以通过加一些氧化剂来让它形成，但是不知道如何检测是否形成了

niangao1980[使用道具]
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发表于 2014-1-14 10:57 资料个人空间短消息加为好友

小中大

你是如何知道没有形成二硫键的？相同方法去检测啊。

bring[使用道具]
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发表于 2014-1-14 10:57 资料个人空间短消息加为好友

小中大

表达出来在上清，楼主如何确定它没有形成二硫键？
加入铜离子，或用其他方法氧化嘛，具体楼主可以再查查，这个是常见的方法。
如果二硫键形成，相对于没有形成的蛋白，它们的构像是不同的，检测办法不少啊。荧光光谱，CD光谱都可以看。简单点，跑个native PAGE应该都是有差别的。反应在HPLC上是否有差别，我不确定，可能要具体去试了，保留时间或许会有差异。

moonlight45[使用道具]
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发表于 2014-1-14 10:58 资料个人空间短消息加为好友

小中大

做个氧化还原分析就搞定~~

windy+++[使用道具]
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发表于 2014-1-14 10:59 资料个人空间短消息加为好友

小中大

检测二硫键是否形成，跑个非还原胶作对照就可以啦，其显示的分子量与还原胶是有区别的。

caihong[使用道具]
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