生化反应和生化分离

各位帮帮忙，我用了反相硅胶柱（ODS）分离样品，用的体系是甲醇-水，从纯水开始直到100%的甲醇，当在100%甲醇的洗脱下，样品还是不能全部下来，结果把反相硅胶柱给污染了，请问一下各位，有什么方法可以使其再生啊？？反相材料实在是太贵了，怕老板教训啊，拜托了，各位！！！！

谢谢各位啊，不过，我说的不是HPLC所用的反相柱，我指的是像我们用于分离提取的正相硅胶柱一样的一般的柱子，但其用的装柱材料是反相材料（C18），用于大极性物质的分离，且上样量也很大，我用时上了大约用8g的样品，因为其溶解性不好，所以才残留在上面，不知道怎样可以使其再生啊？

还有，想问问各位，可以用碱来洗吗？会不会破坏其结构啊？

[ 本帖最后由 llhy_510080988 于 2010-8-6 20:10 编辑 ]

10%甲醇水溶液-甲醇-异丙醇-氯仿-异丙醇-甲醇-10%甲醇水溶液。每种不少于20分钟。再不行，0.2的流速反冲色谱柱！

柱子的说明书上应该有处理的方法，按照其处理即可。
如果还不行，类似的柱子可以挖开接流动相柱头处的填料，然后用新的填料补充进去。这样可以操作需要一定的经验，否则很容易损伤柱子~

色谱柱的再生：用5%（V/V）乙腈水冲洗20-30倍柱体积后，用纯甲醇冲洗20-30倍柱体积，再用四氢呋喃冲洗20-30倍柱体积，再反过来冲洗。

一般来说色谱柱不能反冲，只有在没有其它办法或生产者指明该柱可以反冲时，才可以反冲除去留在柱头的杂质。否则反冲会迅速降低柱效。

多冲一下或者换成乙腈试试

这个要看你的样品是什么了，要针对不同的样品选择不同的溶剂洗脱。

反相柱的再生：
反相柱的再生：依次采用20-30倍的色谱柱体积的甲醇：水=10：90 （V/V），乙腈，异丙醇作为流动相冲洗色谱柱，完成后再以相反顺序冲洗色谱柱

楼上方法很好，反向洗脱即可！

请问一下楼主是不是说的是中药分离用的硅胶柱呀？还是分析用的反相柱？？

要看样品。

乙腈、异丙醇、正己烷强度依次变大。

异丙醇！！！