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以下是裂解液配方和方法
裂解液配方: 通常组织裂解液有三种,
1. 全细胞蛋白的分离提取液(mmol/L )：Tris-HCl 50, pH 7.5, NaCl 150, EDTA 5, EGTA 5, SDS 2%。
2. 胞浆蛋白提取液(mmol/L): Tris-Cl 50，pH 7.5, EGTA 2, EDTA 2, (DTT 2, Na Pyrophosphate 5, KF 50, Okadaic acid 50M，5mg/L each of leupeptin, aprotintin, pepstatin A, chymostatin)。(括号内为磷酸酶抑制剂,如果不做磷酸化可不加如)
3. 膜相关蛋白提取液(mmol/L):胞浆蛋白提取液+ 0.5% NP-40。
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胞溶和膜相关蛋白的分离提取:
*冻存或新鲜的组织或细胞，按每mg组织10μl的比例加入胞浆蛋白提取液。
*手持式匀浆器匀浆、超声破碎。
*4℃ 30000g离心30min，取上清液作为胞溶蛋白成分(Cytosolic)保存。
*沉淀物再加入相同体积的膜相关蛋白提取液(胞浆蛋白提取液＋0.5％NP-40)。
*超声破碎，在4℃ 30000g继续离心30min，取上清液作为膜(包括细胞膜和各种细胞器膜)相关蛋白成分(Particulate)。
*BCA法蛋白定量 。
