蛋白质与蛋白组学 » 讨论区 » 经验共享 » 【求助】SDS-PAGE小分子条带不见了

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标题:【求助】SDS-PAGE小分子条带不见了

coolcool[使用道具]
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发表于 2014-1-19 13:30 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
话说……
这家的marker我就没看到过小分子亮的那两个带
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发表于 2019-8-21 16:11 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
请问解决了吗？我最近也是遇到这个问题，marke25KD以下的两条带和小于这两条带的蛋白都不清晰，看不清楚。
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chenzhen2016[使用道具]
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发表于 2023-8-10 11:04 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
由于我无法看到你提到的图像，我将根据你的描述尝试为你解释可能导致小分子条带在SDS-PAGE中消失的一些常见原因：

1. 样品准备： 小分子蛋白在SDS-PAGE中容易受到样品准备的影响。如果样品准备不当，可能会导致小分子蛋白无法进入凝胶或难以分离。

2. 凝胶浓度和聚丙烯酰胺浓度： 小分子蛋白在高浓度聚丙烯酰胺凝胶中容易迁移过快，使得它们可能在凝胶底部扩散而看不到。你可以尝试使用更低浓度的聚丙烯酰胺凝胶来解决这个问题。

3. 电泳条件： 电泳条件的设置也可能影响小分子蛋白的迁移。你可以尝试减缓电泳的电流或延长电泳时间，以便小分子蛋白有足够的时间迁移到凝胶上。

4. 缓冲液pH： 缓冲液的pH也会影响蛋白的电荷状态，从而影响它们在凝胶中的迁移。确保使用正确的pH条件。

5. 样品加载量： 小分子蛋白的加载量也可能影响它们在凝胶中的显示。过多的样品可能导致条带过于密集，使得小分子蛋白无法清楚地显示出来。

6. 蛋白结构： 有些小分子蛋白的结构可能导致它们不容易与SDS结合，从而影响它们在SDS-PAGE中的迁移。

如果你已经排除了上述因素，并且问题仍然存在，可能需要进一步详细的实验和分析，以确定造成小分子条带消失的确切原因。你还可以考虑咨询在SDS-PAGE技术方面有经验的同行或专家，以获取更具体的指导和建议。
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chenzhen2016[使用道具]
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发表于 2023-8-18 16:11 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
SDS-PAGE凝胶中出现带子缺失的情况可能是由于多种因素引起的。以下是可能导致你描述的问题的一些原因和解决方法：

1. 样品加载量不足：如果加载的样品量过少，特别是对于低分子量蛋白，它们可能不会形成明显的带子。确保你加载足够的样品量，尤其是对于低分子量的目标蛋白。

2. 电泳时间不足：低分子量的蛋白可能需要较长的时间来跑出。尝试延长电泳的时间，以确保低分子量带子能够迁移出胶。

3. 电泳电流不足：如果电流设置得太低，可能会导致蛋白质在胶中迁移不足，特别是对于低分子量蛋白。确保使用适当的电流条件。

4. 胶的制备问题：如果凝胶制备过程中有问题，比如凝胶聚合不均匀、凝胶老化等，可能会导致带子缺失。确保你的凝胶制备过程是正确的。

5. 电泳缓冲液问题：电泳缓冲液的pH和离子浓度对电泳效果有影响。确保使用正确的缓冲液，并检查是否存在pH偏移或离子浓度异常。

6. 电泳系统问题：电泳系统本身可能存在问题，比如电极不均匀、电泳槽电流分布不均等。确保你的电泳系统正常运行。

7. 蛋白质结构问题：某些蛋白质可能由于其自身的特性而在SDS-PAGE条件下迁移异常，导致带子不明显。这种情况可能需要进行其他分析确认。

8. 试剂问题：尝试检查使用的试剂是否正确，例如样品缓冲液是否与凝胶电泳缓冲液相兼容。

综合考虑以上因素，你可以逐一排除问题，并进行一些小规模试验来找到问题的根本原因。如果问题持续存在，可能需要进一步的实验优化和仪器检查。
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