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IPTG诱导蛋白表达的话,一般有下面几个问题:
1.诱导时机,也就是诱导的菌浓。诱导越晚,菌量越大,容易获得高密度;但相对菌体越老,表达蛋白的时间下降,表达量就可能下降。而诱导得早则菌体密度低,细菌从生长阶段进入表达阶段之后,生长减缓,虽然表达时间延长了,但由于总密度低而导致蛋白表达量不高。因此需要对你得菌以及蛋白做个分析,对诱导时机作出合理得选择。
2.诱导剂IPTG的浓度。IPTG的浓度与蛋白表达的速度相关(其本质应该是转录速度加快了吧?),高浓度表达快,低浓度表达慢。但是IPTG同时具有一定的细胞毒性,浓度越高,对细胞的活性越不利。另外,表达速度越快,蛋白越容易形成包含体。常用的浓度在0.1mM到1mM,也有更多或更少的。
3.诱导温度。一般来说,发酵都分为两个阶段即生长阶段和生产阶段。生长阶段用于菌体生长,一般取比较丰富得培养基和适宜的条件来获得最大的比生长速率;而生产阶段也就是诱导表达阶段,一般换做限制性培养基(E.coli一般不换),降低温度来延缓细菌的生长,延长蛋白表达的时间,从而增加外源蛋白质的表达。同时降低温度也可以在一定程度上减少包含体的形成,一般从30度到24度,最低也有18或16度的。
总得来说建议你降低IPTG浓度,同时降低诱导温度,两个条件都可以做一个梯度实验。同时延长一下表达时间。