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蛋白纯化与结晶

各位前辈好！我准备做蛋白的结晶，现在做到了蛋白的纯化，以前过完镍柱后会告诉离心五到六次进行浓缩，以提高蛋白浓度，后来跑了蛋白胶，发现纯度达不到95%以上，所以，接下来该怎么操作？是否要再用离子交换柱和分子筛再上两次柱？如果，要再过这两个柱，可不可以过完镍柱后先不离心浓缩，等再过完离子交换柱和分子筛后再进行离心浓缩？因为是新手，很多不懂，所以大家多多指教，谢谢！！