蛋白质与蛋白组学 » 讨论区 » 经验共享 » 【求助】有关SDS-PAGE分离胶缓冲液的pH8.8?

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标题:【求助】有关SDS-PAGE分离胶缓冲液的pH8.8?

kulee[使用道具]
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发表于 2014-2-22 16:52 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】有关SDS-PAGE分离胶缓冲液的pH8.8?


有的参考书中写的是分离胶缓冲液pH8.8,有的是pH8.9,甚至在郭尧君编的一本书中都有两个说法,
我查了论坛里的所有有关SDS-PAGE的帖子,没有发现对于这个问题的解释,那么真正操作中到底是按哪个值调节pH呢?
我也做了多年的SDS-PAGE,一直是按照pH8.9来做的,而且也知道实际调pH过程中也会有一点点误差,8.9和8.8不会对结果有太大影响,但是对于理论来讲,我认为总要有一个统一的说法,否则如何教学生呢?
所以我想知道究竟是什么导致了这么一点区别?是偶然,还是内有更深层次的理论?
当然浓缩胶也存在相同问题(pH6.8和pH6.7)...
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kulee[使用道具]
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发表于 2014-2-22 16:55 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

还有一个问题:
关于单体贮液的配制,丙烯酰胺（Acr）和亚甲双丙烯酰胺（Bis）有以下两个比例:
1. 丙烯酰胺（Acr）29.0g，亚甲双丙烯酰胺（Bis）1.0g，ddH2O，37度溶解,定容至100ml, 棕色瓶存于4度。
2. 称 Acr 30g及 Bis 0.8g，溶于双蒸水中，最后定容至100mL，过滤后置棕色试剂瓶中，4℃贮存。
哪个更准确,为什么有如此差别?
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发表于 2014-2-22 16:59 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
有的分离胶缓冲液配方是1.5M Tris-HCl(pH 8.8);
有的分离胶缓冲液配方是3.0 mol/L pH8.8 Tris－HCl缓冲液
到底哪个更准确?
浓缩胶缓冲液也存在这个问题...
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发表于 2014-2-22 17:00 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

分子克隆上面应该比较准确吧
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yjf1026[使用道具]
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发表于 2014-2-22 17:02 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

原理问题
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发表于 2014-2-22 17:04 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

楼上能否说的准确一些，，什么叫原理问题，到底哪个准确？
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发表于 2014-2-22 17:09 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
还有一个问题:
关于单体贮液的配制,丙烯酰胺（Acr）和亚甲双丙烯酰胺（Bis）有以下两个比例:
1. 丙烯酰胺（Acr）29.0g，亚甲双丙烯酰胺（Bis）1.0g，ddH2O，37度溶解,定容至100ml, 棕色瓶存于4度。
2. 称 Acr 30g及 Bis 0.8g，溶于双蒸水中，最后定容至100mL，过滤后置棕色试剂瓶中，4℃贮存。
哪个更准确,为什么有如此差别?
......

===============================================================================================================

没有谁准不准的，二者聚合时比例最佳为19：1，Bis的浓度在5%时凝胶的孔径最小，高于或低于此值时，孔径都相对变大，所以跑dna测序时一般都用19：1的，跑蛋白一般用29：1或37.5：1（就是你看到的30+0.8）的.当然如果你想用其它比例的也是可以的，就像炒菜，盐放多了就咸，少了就淡，饭店里大众口味就是标准，高了或低了都会减少客源，但是却有爱好那一口的，没办法，重要的是适合。
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发表于 2014-2-22 17:10 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
有的分离胶缓冲液配方是1.5M Tris-HCl(pH 8.8);
有的分离胶缓冲液配方是3.0 mol/L pH8.8 Tris－HCl缓冲液
两种都可以，配胶的一般原则是在分离胶中Tris达到的终浓度是0.375M。所以不管你的缓冲液浓度是多少，只要PH值对，最后能稀释到相应的浓度就可以了。
比如胶总体积是10ml，1.5M的buffer就加2.5ml；如果用的是3.0M的buffer就加1.25ml。不足的体积用水不足。
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kulee[使用道具]
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 小中大

ph6.7还是PH6.8呢?
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kulee[使用道具]
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 小中大

分离胶缓冲液的pH是8.8还是8.9呢?
虽说不用那么较真,但我也做了多年的SDS-PAGE,一直是按照pH8.9来做的,而且也知道实际调pH过程中也会有一点点误差,8.9和8.8不会对结果有太大影响,但是对于理论来讲,我认为总要有一个统一的说法,否则如何教学生呢?
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