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标题:【求助】 6X His标签蛋白的纯化求助

mingming0638[使用道具]
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发表于 2014-2-22 17:29 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】 6X His标签蛋白的纯化求助

我用杆状病毒表达系统表达出带有6X His标签的蛋白，请问：选用什么公司的蛋白纯化系统好啊？需要选购哪些试剂？焦急等待中ING……
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mamamiya[使用道具]
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发表于 2014-2-22 17:30 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

你可以买镍琼脂糖凝胶和镍NTA琼脂糖凝胶５或１０毫升重力流的预装柱即可，需要可以买点咪唑，配缓冲液按说明书做就可以．手工操作．不需要特别的设备．国产或进口的应该都可以．但是一定要有售后服务．
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66小飞侠[使用道具]
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发表于 2014-2-22 17:31 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

昆虫细胞杆状病毒表达一般是在胞内。
除纯化之外，蛋白酶降解也是非常重要的。
建议使用Roche 的 蛋白酶抑制剂 cocktail 来保护蛋白，而且粗样品不要放置，第一时间内尽快纯化。
cocktail有两种，因为要上镍柱，所以一定要选择不含EDTA的那种。
好运！
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mingming0638[使用道具]
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发表于 2014-2-22 17:33 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

今天订购了QIAGEN的Ni-NTA Agarose (25ml)，打完折后人民币2362元。以及QIAGEN的Polypropylene Comumns (5ml)，打完折1380元，是不是有点贵啊？
然后又从生工订购了咪唑，10克要263元。
还想买些透析袋，但是不知道哪儿可以买到，哪位战友知道的话，烦请告诉小弟一声啊~！
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mingming0638[使用道具]
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发表于 2014-2-22 17:34 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


QUOTE:
原帖由 66小飞侠 于 2014-2-22 17:31 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

昆虫细胞杆状病毒表达一般是在胞内。
除纯化之外，蛋白酶降解也是非常重要的。
建议使用Roche 的 蛋白酶抑制剂 cocktail 来保护蛋白，而且粗样品不要放置，第一时间内尽快纯化。
cocktail有两种，因为要上镍柱，所以一定要选 ...

谢谢！我也正担心目的蛋白纯化前后的降解呢，我会试试看的。
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huifeng0516[使用道具]
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发表于 2014-2-22 17:35 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
其实可以试一下GE公司的17524701，5×1ml的预装柱，载量40mg/ml。
可以再配一根脱盐柱，置换缓冲液或者脱盐用，效果比透析好多了，用注射器就可以用。
加起来2000块钱左右就可以了。
也有单独5ml的镍琼脂糖凝胶，只要几百元就可以了。货号大概是17526806
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moonlight45[使用道具]
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发表于 2014-2-22 17:36 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

大家好，最近也要做纯化这方面的工作，但经费比较紧张，预装柱有太贵了，如果单独买镍琼脂糖凝胶和柱子，然后自己装柱，这个是不是会便宜一点呢？大家有知道哪里能单独买到柱子的么？一般的公司都只卖预装柱，或只卖镍琼脂糖凝胶？
先谢谢大家了！！
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moonlight45[使用道具]
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发表于 2014-2-22 17:37 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
还有一个问题，镍琼脂糖凝胶是不是可以重复使用啊？
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ero11[使用道具]
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发表于 2014-2-22 17:38 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

镍琼脂糖凝胶能重复使用．我见过客户用最高的是３００次．
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gemei0115[使用道具]
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发表于 2014-2-22 17:38 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
大家好，最近也要做纯化这方面的工作，但经费比较紧张，预装柱有太贵了，如果单独买镍琼脂糖凝胶和柱子，然后自己装柱，这个是不是会便宜一点呢？大家有知道哪里能单独买到柱子的么？一般的公司都只卖预装柱，或只卖镍琼脂糖凝胶？
先谢谢大家了！！

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完全可以买填料自己装柱，这样比较便宜，也可以重复使用。
您可以问一下GE

[ 本帖最后由 gemei0115 于 2014-2-22 17:40 编辑 ]
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