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标题:【求助】 6X His标签蛋白的纯化求助

mingming0638[使用道具]
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发表于 2014-2-22 17:43 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
大家好，最近也要做纯化这方面的工作，但经费比较紧张，预装柱有太贵了，如果单独买镍琼脂糖凝胶和柱子，然后自己装柱，这个是不是会便宜一点呢？大家有知道哪里能单独买到柱子的么？一般的公司都只卖预装柱，或只卖镍琼脂糖凝胶？
先谢谢大家了！！

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我听隔壁实验室的同学说，柱子可以对注射器、针筒什么的加以改造而成，听他的意思好像是说，柱子的要求不是太高的，买好镍琼脂糖凝胶就行，当然我想能买到柱子的话总比改造来的好吧。
我在东胜创新还找到了Novagen也卖填料的，如Ni-NTA His.Bind Resin(树脂)，10ml打折前是1740元，His.Bind resin打折前是10ml 1392元。
具体可以联系东胜创新以及楼上战友所说的GE试试看。
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mingming0638[使用道具]
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发表于 2014-2-22 17:44 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

还有，订购镍螯合树脂一定要提前1个月起订，因为很多公司在国内没有现货，需要从国外进口二来，要3-4周的说，好浪费时间啊。
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jkobn[使用道具]
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发表于 2014-2-22 17:45 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

进口的那样也许没现货,因为他们大多要攒够大的单子这样优惠多,所以没现货,对国产的就没这样的问题,其实国产有的也是不错的.无论镍琼脂糖凝胶或镍NTA琼脂糖凝胶不再那么难生产了.所以不想等时间也可以选国内的.
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finger[使用道具]
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发表于 2014-2-22 17:45 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

买点填料，自己就能做了，很简单，只是要预防降解，一步纯化很难做到很纯，看你需要了
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mingming0638[使用道具]
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发表于 2014-2-22 17:47 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

NI柱亲和填料对柱子的要求不是很高,用过GE公司的重力柱,操作很方便,推荐!
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zranqi_1[使用道具]
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发表于 2014-2-22 17:49 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
买点填料，自己就能做了，很简单，只是要预防降解，一步纯化很难做到很纯，看你需要了

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纯化后脱盐时通过减小收集体积（根据你后续的实验要求），这样可能会得到几管纯的样品，且也能保证比较高的浓度。
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mingming0638[使用道具]
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发表于 2014-2-22 17:50 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

最近做脱盐的时候,发现回收率只有50%,是不是样品在低盐环境下不稳定?求助
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8princess8[使用道具]
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发表于 2014-2-22 17:50 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


QUOTE:
原帖由 mingming0638 于 2014-2-22 17:50 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

最近做脱盐的时候,发现回收率只有50%,是不是样品在低盐环境下不稳定?求助

那看你选择什么除盐的方法,透析要留意是不是有沉淀,蛋白通常需要有点离子强度才好溶解,不能都去掉盐.如果是过柱子要留意柱子有时候盐浓度低会有非特异吸附,所以也需要点离子强度.
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发表于 2014-2-22 17:51 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


QUOTE:
原帖由 8princess8 于 2014-2-22 17:50 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')


那看你选择什么除盐的方法,透析要留意是不是有沉淀,蛋白通常需要有点离子强度才好溶解,不能都去掉盐.如果是过柱子要留意柱子有时候盐浓度低会有非特异吸附,所以也需要点离子强度. ...

标记的地方我看不懂，样品过脱盐柱时是将目的蛋白和盐分分开了，本来就会低盐的，那么怎样才能“所以也需要点离子强度”呢？
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8princess8[使用道具]
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发表于 2014-2-22 17:53 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

非特异吸附可以加一步预洗
电导仪测一下更好
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