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标题:【求助】关于表达100KD大小蛋白

guagua[使用道具]
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发表于 2014-3-8 09:10 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】关于表达100KD大小蛋白


请问各位大侠：
我想表达100KD大小的一个蛋白，原先想要原核表达，不知道大家认为怎么样？而现在看到论坛上有人说大于80KD的可以考虑用真核表达，对于真核表达我实在没有经验，大家认为如何？用什么表达系统（包括载体和细胞）比较好？谢谢大家！
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发表于 2014-3-8 09:10 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

如果该蛋白有较多翻译后修饰且蛋白活性与位点的修饰有很大相关性，应选择真核表达，如果不需要可以考虑原核表达，具体要根据蛋白的性质来选择。真核表达载体可以选择pcDNA3.1,pCI-NEO等载体，invitrogen公司网站上有详细的目录。细胞可以选择HEK293，CHO，COS-7，hela等
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yjf1026[使用道具]
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发表于 2014-3-8 09:10 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

bac-to-bac
我现在就在用这个系统
但是还在摸索间段
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发表于 2014-3-8 09:11 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

这几天发现个问题，真核的表达量是不是很低呀？我想要100ug的蛋白的话是不是只能用原核表达？
如果用原核表达的话，想这种100KD大小的蛋白用PET-28和PET32怎么样？谢谢大家!
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发表于 2014-3-8 09:11 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
用PET28a表达过66KD和104KD 蛋白，可以表达。
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hold住[使用道具]
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发表于 2014-3-8 09:12 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


QUOTE:
原帖由 guagua 于 2014-3-8 09:11 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

这几天发现个问题，真核的表达量是不是很低呀？我想要100ug的蛋白的话是不是只能用原核表达？
如果用原核表达的话，想这种100KD大小的蛋白用PET-28和PET32怎么样？谢谢大家! ...

我表达国150kD的，我老板曾经用pET28a表达国280KD，C.T.Walsh曾经用pET28a表达国700kD的！相信大肠杆菌的力量。。
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SSSsea[使用道具]
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发表于 2024-1-24 11:17 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

回复 #6 hold住 的帖子

您好，请问方便看看您老板用pET28a表达280kD蛋白的文章吗？我现在用pET28a表达180kd、100kd和47kd的蛋白，只有47kd的做出来了，实在不知道怎么办了
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