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标题:【求助】我该选择多大的超滤膜？

laughing妹[使用道具]
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发表于 2014-3-10 15:41 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】我该选择多大的超滤膜？

欲分离细菌培养液中的蛋白33-38kd，想用超滤的方法分离其中的大分子蛋白（100-200kd）,可否选择50kd的膜？
多谢！
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sunnyB[使用道具]
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发表于 2014-3-10 15:41 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

可以,进口的滤管，膜孔径的误差范围是30%
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glass[使用道具]
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发表于 2014-3-10 15:42 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

超滤不是一种有效的分离手段。因为超滤膜的截留值是一种统计学上的平均值，而不是一种绝对值；相同分子量的蛋白也并非一定表现出同样的体积大小。也就是说50KD的膜并不能保证完全截留100－200kd的蛋白，也不能保证33－38kd的蛋白完全穿透。
超滤一般用来浓缩蛋白或交换缓冲液，一般要求需要截留的蛋白分子量至少为超滤膜截留分子量的3－5倍，才能达到有效截留。
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发表于 2014-3-10 15:43 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

多谢二位的指导！
我想用Viva flow 50系列的膜（50kd）包，但就怕luotx站友说的那样33-38kd的蛋白并不能过膜。
如果用100kd的能怎么样？
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qianqin1977[使用道具]
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发表于 2014-3-10 15:46 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

如果有条件，最好能用分子筛。superdex 75的柱，100kD以上的蛋白在外水体积。
如果必须用超滤，100kD的应该比50kD的效果好。
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shenkunjie[使用道具]
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发表于 2014-3-10 15:46 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

完全同意　战友的建议，这种情况90%是不能用超滤法分离的。　　我做超滤的技术支持几年了还没有见到过这种分离的，楼主三思。
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sunnyB[使用道具]
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发表于 2014-3-10 15:47 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

也不能说完全不可以。
我用过50kD超滤，在滤出液中能得到大部分约20kD的物质（没有滤出的有一小部分）。当然，滤出液中也有大于50kD的蛋白，但数量很少。
所以要做到完全分离是很困难的，只能用来粗分离。
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发表于 2014-3-10 15:47 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

感谢二位的帮忙！
实验室有superdex 200（90cm）的柱子，但是上样量很少，洗脱时间很长。
想先盐析，然后超滤，粗分离一下，顺便除盐，最后上离子交换柱（想用SP sepharose H.P.）。不行再用分子筛。
文献上的纯化策略是盐析，透析，CM sepharose，Mono S柱。
但是Mono S柱太贵了！所以想先用超滤纯化一下。
希望有经验的站友继续提出宝贵意见。
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laughing妹[使用道具]
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发表于 2014-3-10 15:51 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

顺便问一下：
GE公司的凝胶选择指南上说superdex 200的分离范围是10kd--600kd.
用superdex 200纯化33-38kd的蛋白能行不？
会不会拖尾？
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windy+++[使用道具]
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发表于 2014-3-10 15:52 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

superdex 75的分离范围在3kD-70kD，分辨率比200的更高，效果更好
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