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标题:【讨论帖】western blot 中抗体的重复应用问题

PINK[使用道具]
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发表于 2014-3-10 17:56 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

没有稀释的时候抗体在-20℃下不结冰应该是加了甘油，甘油通常能有效地增强蛋白质的稳定性，并且使蛋白质能在-20℃不结冰状态下保存。我现在用的博士德的抗体产品中含有30%的甘油，你看看你购买的抗体产品的说明书就知道了。
防污染可添加0.02%的叠氮钠，或0.01%的硫柳汞。叠氮钠能阻断细胞的电子传递链，对许多生物体都有毒性，因此不能用于活体实验；因为含有氨基而能干扰许多标记方法（不过在我的实验里有一步是会受氨基影响的，但在这一步中我做了对照，发现叠氮钠并没有对我的实验产生什么不良影响）；不能用于辣根过氧化物酶标记的抗体。而硫柳汞不含氨基，不影响基质的稳定性。
容器壁对蛋白质的非特异性吸附可以造成蛋白质变性，因此在稀释的抗体溶液中加入BSA是很有必要的。
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bluelake[使用道具]
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发表于 2014-3-10 20:22 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我的一抗用含脱脂奶粉的TBST稀释，能否加叠氮钠？如果可以，加多少？我看上面的帖子有的说0.2％，有的说0.02％。望诸位高手快快告知，明天就要稀释宝贵的一抗了。THANKS.

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我的经验是0.02%就可以。
在做色谱时的流动相防腐时一般用0.02%（见2005年版药典三部附录）
放射免疫分析法中的缓冲液是适合抗体和抗原结合的，《实用免疫细胞与核酸 》中给出的浓度是0.1%。
说明在免疫学实验对它的浓度要求不是很严格的。只要能起到防腐效果又不干扰抗体和抗原反应就可以的。
以上回答不知对你有帮助否？
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eric930[使用道具]
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发表于 2014-3-10 20:25 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我已经按照各位的指导按0.02％的浓度加入了叠氮钠。谢谢大家。
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bluelake[使用道具]
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发表于 2014-3-10 20:25 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
叠氮钠不能用于辣根过氧化物酶标记的抗体 吗？那我加什么呢？明天就要用了，大家给我赶紧解答一下。
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jingling845[使用道具]
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发表于 2014-3-10 20:26 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

叠氮钠不能用于辣根过氧化物酶标记的抗体，那你可以加0.01%的硫柳汞。
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发表于 2014-3-10 20:26 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

谢谢您的解答.我还想问一下,用去离子水还是用TBS配制?谢谢.
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我佛慈悲[使用道具]
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发表于 2014-3-10 20:27 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

请问５％的ＢＳＡ用什么配啊，是ＰＢＳ还是水啊
另外抗ＧＳＴ的一抗，哪儿卖的又便宜，又好用啊，谢谢
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我佛慈悲[使用道具]
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发表于 2014-3-10 20:28 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

＂封闭液最好用脱脂奶粉配＂脱脂奶粉是固体啊，怎么用啊，加多少啊，请各位指教
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vvmmoy[使用道具]
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发表于 2014-3-10 20:28 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
封闭液最好用脱脂奶粉配＂脱脂奶粉是固体啊，一般是5%的.融入TBA-tween 20的液体中就可以的.但是一定要现用现配.
有关抗体的反复应用的问题,一定要记住:每个抗体的储存条件不同影响了反复应用的次数.
有的抗体可以用-20度反复应用3-4次.
但是有的抗体则不能,还有的抗体都可以在-80度贮存的条件下反复用几次.
对于应用0.2％的NaN3,也是这个道理!你可以search一下抗体公司的网站,一般都有技术支持的,可以看看!!!
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xueyouzhang[使用道具]
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 小中大

不知有没有重复利用二抗的?我的二抗重复用了一次,结果没出结果!是不是二抗不能重复利用啊?
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