小中大呵呵,正好我也在做包涵体的表达复性什么的.不过我也没有任何经验,只能从自己做过的方面来考虑了.
第一,你收集到破碎好的包涵体后,是否进行了包涵体洗涤?我们这里做的时候,都是先用TRITON洗一次,完了2M尿素洗两次,再1M尿素洗两次,最后离心后,才用6M的尿素溶解;
第二,你用多少克包涵体溶解到多少毫升的6M尿素中?如果你的包涵体量过多,可能就不溶了;
第三,我做的时候,是把包涵体溶解后,再进行复性,复性完了,把复性液离心,上清用三氯乙酸沉淀后再跑PAGE电泳,沉淀直接进行PAGE电泳,来看复性如何
不清楚你的包涵体是否需要进行复性,还是可以直接跑电泳.我自己也没有什么经验,是不是你的包涵体加得过多,直接就没有溶解在尿素中.你再说详细一些吧.
GOOD LUCK!!大家多交流多讨论,相互促进相互学习,共同进步