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标题:【讨论专区】蛋白质组学研究方法

喵咪[使用道具]
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发表于 2014-4-2 22:55 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我觉得质谱样品中角蛋白的污染主要在于空气，我在国外时看老外做质谱时，没穿工作服、没戴帽子、没戴手套，结果照样好得很，我问他们，他们感到很惊讶，想必大概是国情不同所致吧！
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ritou1985[使用道具]
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发表于 2014-4-2 22:55 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

2D Electrophoresis using immobilized pH gradients - Principles and Methods
cuturl('http://www1.amershambiosciences.com/aptrix/upp01077.nsf/Content/literature_intro')
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ritou1985[使用道具]
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发表于 2014-4-2 22:56 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

2D Electrophoresis using immobilized pH gradients - Principles and Methods
cuturl('http://www1.amershambiosciences.com/aptrix/upp01077.nsf/Content/literature_intro')
thanks!!! much time to download!
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yyaxw84[使用道具]
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发表于 2014-4-2 22:56 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
请问2-D系统伯乐和法玛西亚的，哪个公司的好？
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喵咪[使用道具]
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发表于 2014-4-2 22:56 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

如果就系统而言，我以为没有太大分别，但胶条好像是AMERSHAM的要好一点，层析和电泳可是AMERSHAM的强项，仅是我个人意见噢。另外，第二相电泳能跑24CM的AMERSHAM有可同时跑六块胶的，十二块很累人的，除非高通量。
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轰轰[使用道具]
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发表于 2014-4-2 22:57 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

* 角蛋白污染问题：防不胜防。楼上说国外实验室不厉害，不是吧。
倒是各种防污染措施（楼上已提到）做足，CBB染色就应不见了。银染时还存在，不知如何了。理论上的预防方法都有介绍，开工还是存在啊。
* SELDI除了使用的抗原/抗体芯片外，还不能鉴定蛋白质。另MALDI（SELDI后面的检测仪也是）对普通蛋白质分子（数十KD大小）测不准的。cuturl('http://www.ciphergen.com.cn/')
* 开展2D不难，20万RMB可用AMEISHAM的了，当然消耗品贵，不过做熟了自己配试剂可节约不少钱的。
*请问：
是否能用Immobiline做板胶IEF？理论上似乎可以，请指教
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发表于 2014-4-2 22:58 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
2D电泳的蛋白上样量有多大？
我们实验室一般100微克到800微克。100微克做分析，700-800微克做质谱。根据你的实验，你先要摸摸条件，因为上样量小了，有些点就没有了。上样量大了，蛋白太浓分不开。
提蛋白时有什么要求？
根据你实验的要求，一般要冷冻离心。其他如蛋白的甲基化、磷酸化等则根据你的实验来定。不同需要细胞的破碎方法也不同。
胶上的蛋白可否进行质谱分析？质谱分析能估出多少个氨基酸？准确程度有多少？
可以，将感兴趣的点抠出，胰酶消化、抽提、干燥后，就可做质谱了。至于准确度，看我发的上一个贴子。如有问题，尽管说，或直接发在我的信箱里也行。
......

==============================================================================================================

最近我做了次2-DE，但是出来的点很少且浅，估计是上样量不够，我曾用BCA和BRADFFORD两种方法测过蛋白浓度，好象都不可靠，请问您是用什么方法进行蛋白定量的？谢谢！
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发表于 2014-4-2 22:58 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
楼上说的偏激了.我们这里除了没有全自动的工作站,仪器也算全的了.凑巧我也正在从2D到MALDI-TOF-TOF的做,算是现在蛋白组学的一整套技术了.我的体会就是它象其他领域一样,方法很重要.就是别的实验使用的很好的现成的方法,用在自己的实验室也需要修改优化.不是有仪器就可以的.
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发表于 2014-4-2 22:59 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

BCA法、BRADFFORD法都测不准，我们使用的是AMERSHAM专门针对2D的测蛋白浓度试剂盒2D QUANT KIT，感觉挺准的。其基本原理就是把蛋白质沉淀下来，去除裂解液，再重溶蛋白质，再测浓度。各位有兴趣可以试试。或者自己配点试剂做做。
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子衿青青[使用道具]
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 小中大
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