小中大我个人的经验是蛋白质提取好测好浓度后迅速分装，每次就拿出来一管一管的用，融化后用不完的样品扔掉，决不要再用，蛋白质冻融后降解很快。不要考验一下蛋白质的抗降解能力。
另外，做WB之前多去看看文献，查准提取蛋白的方法以及选用抗体的品牌，型号等等，不要在这些方面花时间。开始做WB的时候就不要再去反复的搞这些，都是不应该浪费的精力。
其次，在初次做WB时，多做考马斯染胶和染膜，确定蛋白质跑胶转膜良好再去杂交显影，不要等到显影后再发现有问题，浪费钱老板要骂的。
其实做WB并不难，就只怕你考虑不周就开始做。步骤很多，每一步都要确保稳定可靠再进行下一步。个人意见，供参考。
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说的是啊！！如果是现在的我做，肯定和刚开始不一样，没办法，吃一堑长一智吧！！
你提供的样品保存方法不错！以后就照着你的做。
楼上几位兄弟提到了丰度的问题。我测过的，感觉还是蛮丰的，呵呵。
我昨天又取了新鲜的心脏（原来是肺），这次可是什么都新鲜了，明天看结果。如果还不行，换抗体！！！
