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标题:【求助】怎么在堆积胶里就分离了呢?

veiwu[使用道具]
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【求助】怎么在堆积胶里就分离了呢?

这几天跑电泳出现了蛋白和MARKER在堆积胶不堆积,就有点分离了,到堆积胶和分离胶交接的地方也没有堆积成一条线,这是什么原因呢,同样地样品我让师姐帮我跑了电泳(从做胶和仪器以及电泳液都是师姐的),没有出现在堆积胶就分离出条带的现象,说明不是上样缓冲液的问题吧,我自己重新检测了各个试剂的PH值,也没有问题,又分别换了师姐的丙烯酰胺、Tris(又分别做了两次),还是一样的问题,过硫酸氨是新买的分装好现用现配的,不知道到底是哪里出了问题???
而且样品的溴酚蓝总是在MARKER的倒数第二条的位置(17kd),以前都是和最下面一条MARKER(11kd)在一条线上,这是为什么呢???希望大家给帮帮忙吧!!!谢谢了
要感谢cake,我看了你给我的cuturl('http://www.dxy.cn/bbs/thread/9443451'),好像和我出现的问题不是很一样,我的是连MARKER都在堆积胶里分开条带了(因为堆积胶1CM,所以只能看见隐约的条带),到了堆积胶和分离胶交接的地方也没有压成一条线,就直接这么分开着跑下去了,不知道是什么原因啊?Sad
请大家赐教!!!谢谢!!!
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堆积胶用的是低电压吗?要不就是配的胶有问题.
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堆积胶用的是90V电压,当时的电流到了三四十左右,胶我分别换过了丙烯酰胺以及Tris,我自己的也从新侧过PH值了,还会有什么原因呢?谢谢
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veiwu[使用道具]
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有没有大虾指点一下,不知道怎么回事啊!!!真着急啊!电泳跑不好后面的都做不了了。跑到分离胶跑一段时间MARKER还可以跑的比较漂亮,但是就是不知道怎么在堆积胶就分离了呢?
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seagate[使用道具]
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这个上样缓冲液是新配的吗?
怀疑可能是溴芬兰的问题,也许溴芬兰纯度不好,部分与什么其它东西形成复合物了,所以才会出现分离,也才会出现溴芬兰前沿后移的现象,换用其它的溴芬兰看看呢?
个人见解!
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veiwu[使用道具]
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上样缓冲液是新配的,师姐用我的样品跑没有出现在堆积胶的分离,MARKER在堆积胶也分离了,这是什么原因呢?谢谢
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seagate[使用道具]
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溴芬兰是用的同一个吗?
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是呀,就是我变性好的样品,我的MARKER,只不过是师姐配胶的试剂和电泳缓冲液。
后来我也分别换了师姐的丙烯酰胺以及Tris做胶,跑出来MARKER还是在堆积胶就分离出条带了,不知道是怎么回事呢?着急人啊!!!谢谢,帮忙一起分析一下吧。
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seagate[使用道具]
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是否梳子插入不及时呢?这样会使拨梳子时有可能带起一层薄膜,有无发现上样时有什么异常,如样品沉得不是太底部?
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veiwu[使用道具]
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我是灌完堆积胶就插梳子的,拔的时候也没觉得和平时有什么不同,上样我是先上样,再加电泳缓冲液,因为上样缓冲液中有甘油,所以样品都在孔底。以前也是这个顺序,也没有出现堆积不好的现象。唉,头都大了,这几次全部都是这样,奇怪啊?!!
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