【求助】怎么在堆积胶里就分离了呢？ - 经验共享

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标题:【求助】怎么在堆积胶里就分离了呢？

seagate[使用道具]
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发表于 2014-4-13 21:45 资料个人空间短消息加为好友

小中大

你师姐还有上样缓冲液吗？全部用她的试剂试过了吗？包括上样缓冲液。
胶凝的时间够不够，有漏胶现象吗？
玻璃板洗得干净吗？有无可能存在玻璃板上有杂质吸附？
浓缩胶与分离胶之间有气泡或不紧密吗？

veiwu[使用道具]
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发表于 2014-4-13 21:45 资料个人空间短消息加为好友

小中大

回复 #11 seagate 的帖子

谢谢，我跑过师姐的样品（她变性过的蛋白），好像也是一样的散散的溴酚蓝。
漏胶现象没有。
玻璃板是用洗洁精洗后用去离子水冲洗，然后用方纸巾擦的。
表面看浓缩胶和分离胶之间没有气泡的样子。
请问，会不会是电泳缓冲液有问题呢？会不会和TEMED有关呢？

seagate[使用道具]
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发表于 2014-4-13 21:46 资料个人空间短消息加为好友

小中大

回复 #12 veiwu 的帖子

1.TEMED失效有可能会使胶凝固不均匀。凝固时间延长。
2.电泳缓冲液用过你师姐的吗？PH值偏低，会影响浓缩胶的压缩能力，可能会使溴芬兰的条带增宽，不过从你的现象，出现溴芬兰分离上来看似乎是溴芬兰不均一的可能性大一点。

veiwu[使用道具]
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发表于 2014-4-13 21:46 资料个人空间短消息加为好友

小中大

回复 #13 seagate 的帖子

电泳缓冲液没有用过师姐的。
我的是MARKER在堆积胶就分离了，溴酚蓝就是没有压到一条线上，感觉有点散的样子。而且在分离胶的时候溴酚蓝没有和MARKER最小分子量的在一条线上，在上面一点，有点散，那我重新再配一下上样缓冲液试试吧，然后试试师姐的电泳缓冲液，看看会不会是这个问题，谢谢seagate了！！！

veiwu[使用道具]
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发表于 2014-4-13 21:47 资料个人空间短消息加为好友

小中大

我重新配了电泳缓冲液，倒是在堆积胶压成一条线了，可是为什么在分离胶是从大分子量的MARKER一条一条向下分离，而且分到43KD的条带时候下面小分子量的MARKER就不怎么分开了，延长时间跑也只是大分子量的MARKER条带分得越来越开（8％的分离胶），这是为什么啊？！！！
向大家请教啊！！！急啊！！！

cbou876[使用道具]
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发表于 2014-4-13 21:47 资料个人空间短消息加为好友

小中大

对照Marker的条带图形说明看有没有问题
的确是跑得时间越长分得越开的

veiwu[使用道具]
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发表于 2014-4-13 21:47 资料个人空间短消息加为好友

小中大

一直用的是这个MARKER的啊，以前没有出现过跑到43KD下面的就不分开了，现在是到43的时候下面不分开，上面的越拉越宽，这个MARKER最小到11KD啊，请问这是什么原因啊？谢谢

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