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关于SDS-PAGE胶条回收！

我现在正在做page胶内的蛋白回收，都一个多月了一直做不出结果，回收完成跑胶全是空白，我的操作是这样：
跑胶考染后，切下条带，手术刀切碎成小块，NH3HCO3/ACN 脱色吸出，加ACN干燥后吸出，加入0.25%氨水，用研磨棒将胶块研碎，超声辅助，重复几次氨水超声，收集上清后冻干，复溶跑胶就是没有任何条带啊，（我们这边SDS-PAGE有专人做）急啊。。。头发都白了，大家帮忙看看哪里可能出问题，先谢谢了。。