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标题:【求助】western 没有结果，为什么啊？

birdfish[使用道具]
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发表于 2014-4-16 16:22 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

电泳时有浓缩胶和分离胶，但我统一用100V跑的，难道浓缩胶和分离胶跑电泳时的电压是不一样的吗？
封闭用的脱色摇床
我用的是pierce的蛋白定量试剂盒，上样的总蛋白有30ug,电泳时用的预染marker，MBI的，
我的错误如此之多，谢谢大家帮助，非常感激大家
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birdfish[使用道具]
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发表于 2014-4-16 16:23 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

为什么转膜后预染marker只有一条带转到膜上去了呢
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taoshengyijiu[使用道具]
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发表于 2014-4-16 16:23 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

哪一条转上去了？
胶上还有哪些分子量的预染marker条带？
转完膜以后也可以把胶用烤马斯亮蓝染一下看看
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birdfish[使用道具]
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发表于 2014-4-16 16:23 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
看上去很亮，分子量较最小或者最大的那条，我没太注意，胶上也没有预染marker的带了
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ladyhuahua[使用道具]
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发表于 2014-4-16 16:24 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

...
不重视观察症状，怎么去分析问题啊……
要么会不会转过头，要么会不会你的膜有问题，要么你的缓冲液问题，要么大小不对有点短路诸如此类
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avi317[使用道具]
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发表于 2014-4-16 16:24 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

浓缩胶80伏，约30分钟，待溴酚兰跑入分离胶，改为120伏，跑大约一个半小时，根据预染marker决定中止时间。上样量尽可能大些，最好能上到70ul.封闭1-2个小时都可以。一抗过夜孵育。你首先应从制样、电泳、转膜、显影等环节来找原因，看问题究竟出在那里。我一般压片5分钟，显影2分钟。不知道对你有无帮助？
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avi317[使用道具]
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发表于 2014-4-16 16:24 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

对不起，是70ug，打错了。
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