蛋白质与蛋白组学 » 讨论区 » 经验共享 » 【求助】诱导原核表达

采购询价

点击提交代表您同意 《用户服务协议》 《隐私政策》

 14  2/2 ‹‹12
 
需要登录并加入本群才可以回复和发新贴
打印 | 推荐 | 订阅 | 收藏

标题:【求助】诱导原核表达

remenb[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 75236
精华 0
积分 631
帖子 941
信誉分 100
可用分 5531
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-10-20
状态 离线
11

发表于 2014-4-19 10:13 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

SDS PAGE只是检测蛋白大致分子量，并不准确，有时不是同一批配置的试剂，条带位置也有可能不一样，另外大家用得都是软件根据Marker来推算分子量，有些误差也是正常
对于细菌诱导，特别是BL21 等DE3 溶源菌，经常会出现诱导不表达或者表达量很低的情况，这是菌种弱化的结果。很多说明书都不推荐保存表达菌株，长时间冻存，细菌活力降低。我们都是保存好质粒，要表达时转化一批，筛选高表达菌株，进行大规模表达
顶部
vivian4123[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 75243
精华 0
积分 417
帖子 494
信誉分 100
可用分 3331
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-10-20
状态 离线
12

发表于 2014-4-19 10:13 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

在配酵母贮存液时,遇到生物素不能溶解双蒸水中,这个问题怎么办?
顶部
rxcc33[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 79965
精华 0
积分 633
帖子 885
信誉分 100
可用分 5303
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-12-18
状态 离线
13

发表于 2014-4-19 10:14 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
SDS PAGE只是检测蛋白大致分子量，并不准确，有时不是同一批配置的试剂，条带位置也有可能不一样，另外大家用得都是软件根据Marker来推算分子量，有些误差也是正常
对于细菌诱导，特别是BL21 等DE3 溶源菌，经常会出现诱导不表达或者表达量很低的情况，这是菌种弱化的结果。很多说明书都不推荐保存表达菌株，长时间冻存，细菌活力降低。我们都是保存好质粒，要表达时转化一批，筛选高表达菌株，进行大规模表达

==============================================================================================================

尊敬的老兄：
我做BL21表达分子量100多点的蛋白，第一次表达了，PAGE都看出比较明显的差别，可是WB检测很弱，重复DE3 表达转化诱导几次，就再也没有表达成功。有什么高招指导吗？ 谢谢！
也同时请别的高手出招，谢谢！
顶部
rxcc33[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 79965
精华 0
积分 633
帖子 885
信誉分 100
可用分 5303
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-12-18
状态 离线
14

发表于 2014-4-19 10:14 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
这种现象比较常见，主要是菌种的活性降低了。
建议重新提质粒，然后转化。
表达菌株一定要重新做感受态。将提出的质粒转化到新的感受态表达菌株就行了。

==========================================================

现在有卖的DE3，新买的，我没有做出来！重新做感受态一定非常重要吗？
顶部
 14  2/2 ‹‹12