小中大填料的寿命其实和样品以及维护有很大的关系,就填料本身的稳定性而言,一些小分子配基的亲和填料要是偶联用稳定的方法,重复上几百次以上也是没问题的,例如镍琼脂糖凝胶我一个朋友就曾经用了300来次,所以并非所有亲和填料的寿命就短,对于大分子的配基的亲和填料是寿命短点,但是那也和活化偶联的方法有很大关系,同样的抑肽酶配基如果选择NHS或者CNBr活化的偶联，１０多次后载量就下降很明显，很难工业化，但是如果改用更稳定的方法，那寿命就延长很多，个人觉得将来亲和和高分辨率的填料都会在纯化中大放异彩，其实凝胶柱子和离子交换相对处理量和效率来说我不觉得便宜，因为需要用更大的量，更长时间，更多步骤，而亲和有时候只需要１０％的填料就够了，尤其当越来越多蛋白的特性更清楚的时候，亲和往往会很好用，如现在抗体纯化大多会首先考虑亲和，因此大规模用亲和只是个时间问题．何况凝胶柱子其实是很难放大，费用很高，寿命也没想象的那么长，同样离子交换也是如此，因此并非常规的清洗就能使填料能恢复到和新的一样，好多年前我见工厂的ＤＥＡＥ填料用不了多久就得换新的，所以选择什么工艺还是需要综合考虑，做过对照才能有更好的结论．例如蛇毒中的凝血酶纯化不用亲和是根本做不到电泳单一条带的，就算勉强用常规的方法，那收率也很成问题．
正如白龙版主所言，并非都需要４度去纯化，对于一些不稳定的蛋白，亲和可以时间更短更快，这也是我看好亲和色谱并且花不少时间做活化和偶联以及填料表面处理的原因．
