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标题:【求助】包涵体蛋白复性技术的交流

xueyouzhang[使用道具]
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发表于 2014-4-21 15:54 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】包涵体蛋白复性技术的交流


电泳缓冲液呢，要是用的回收多次的电泳缓冲液， 跑出来的电泳条带分辨率就会降低。
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xueyouzhang[使用道具]
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发表于 2014-4-21 15:54 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

说白了，综述其实就是泛泛而谈，往往是没有真正做过试验的人东一句西一句抄的，参考价值不是很大，但我们在实际试验的过程中会遇到很多小问题，这些小问题不解决试验就不能进行下去，因此可以互相交流，各取所用。
我也没做多少复性试验，但遇到的问题真是不少啊，而且部分问题是综述等说涉及不到的，有问题可以贴出来共同讨论啊。
希望本帖不要沉下去啊！
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flower-201[使用道具]
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发表于 2014-4-21 15:55 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

包涵体溶解液常分为两种，一种含高浓度的尿素，另一种为高浓度的盐酸坬由于后者易与SDS结合形成沉淀影响后面的电泳，所以常选用前者。复性我们常用的是梯度透析，透析所用溶液称为复性缓冲液，其所含尿素浓度逐渐降低，依次为6M，4M，3M，2M，1M，0M.最后透析后的蛋白溶液即位复性后的蛋白，可进一步纯化或直接应用。
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发表于 2014-4-21 15:56 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

蛋白复性，条条框框的理论就那些，我倒是建议可以把自己复性成功的例子拿出来，大家讨论成功的思路及失败的教训，这点比较有用，理论知识还需要实际应用来支撑和验证
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发表于 2014-4-21 15:57 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
说白了，综述其实就是泛泛而谈，往往是没有真正做过试验的人东一句西一句抄的，参考价值不是很大，
I really don't think so.
I think you don't read those wonderful articles.
但我们在实际试验的过程中会遇到很多小问题，这些小问题不解决试验就不能进行下去，因此可以互相交流，各取所用。
我也没做多少复性试验，但遇到的问题真是不少啊，而且部分问题是综述等说涉及不到的，有问题可以贴出来共同讨论啊。
希望本帖不要沉下去啊！
......
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xueyouzhang[使用道具]
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 小中大
我稀世复性后，再经透析，除去盐和尿素，其上清夜再加低浓度盐后就会沉淀，不知为什么
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