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标题:【求助】转移时间

nn255[使用道具]
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发表于 2014-4-21 16:23 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】转移时间


各位老师,
我正在做western,我的目的蛋白为20KD ,转移为湿转(就是三名治),我的使用仪器为bio-rad,请问,我的电流和时间应选多少?急!
谢谢
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mimili_901[使用道具]
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发表于 2014-4-21 16:24 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
一般可以用310mA，90分钟，我一直这么做，挺好的
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yjf1026[使用道具]
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发表于 2014-4-21 16:24 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

请问楼上喜用火木 您用的条件310mA，90分钟蛋白分子量也是20左右的吗？
是否为湿转？
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hold住[使用道具]
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发表于 2014-4-21 16:24 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
80毫安,2小时
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nn255[使用道具]
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发表于 2014-4-21 16:25 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

谢谢，我也觉得３１０mＡ　２h，是不太行的，我用９０ＭＡ　２h，不行
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zsxan1990[使用道具]
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发表于 2014-4-21 16:25 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

做WESTERN很长时间，关于转膜时间也看了很多，问过许多牛人，令我诧异的是，大家的条件差异大的惊人，
我感觉膜的孔径非常重要，要是小孔径的膜，时间长，电流大是没有太大问题的，而大孔径的膜，就有穿膜的危险了，推荐，100MA 170分钟，呵呵，祝实验顺利
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tangxin_80[使用道具]
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发表于 2014-4-21 16:25 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

用0.22um的膜，对于100-20kda的蛋白，4度条件，或将转移槽置于冰中400mA, 1小时即可，没有问题，我一直这样做。
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nn255[使用道具]
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发表于 2014-4-21 16:26 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我用的是PVDF膜 湿转 20左右到100左右都能转上呀。
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xyw5[使用道具]
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发表于 2014-4-21 16:26 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

应该和转膜装置有关吧，楼上的湿转都是biorad的小胶电泳槽吗
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