液相色谱

最近在做原料药的有关物质方法验证，小弟是头一次搞这个东西，有很多问题都不大明白，特向各位老师请教。有些问题请不要见笑。。。。
有关物质采用的HPLC方法
岛津的液相10AT
流动相：0.05mol/L的磷酸二氢钠(PH=3)：甲醇：乙腈=90:6：4
柱子：C18
流速：0.8ml/min
检测波长：210nm
进样量：20ul
问题
1、在进行检测时，空白在2.8-3.1分钟之间有一个很小的峰（峰高大概是0.07mv，想忽略不计可是他毕竟占一定的峰面积啊）。不知道是什么原因，
2、此空白峰出峰时间和我们样品的一个杂质（丙氨酸）出峰时间正好重叠，而且峰形不好，达不到注册要求的（对称性和分离度），但主峰符合要求。

[ 本帖最后由 zhangyandong4 于 2010-9-3 08:11 编辑 ]

调整分析方法～

2.8min左右一般是进样后系统死体积造成的波动，所以你在空白里也能看到。
另外，你的检测波长是210，接近甲醇等的末端吸收，所以基线会比较难看。

空白峰不就是溶剂峰吗？溶剂和流动相是一样的吗？
检测波长选在210nm，甲醇的末端吸收在205nm，应该也有一定的影响吧

空白出峰只能是溶剂峰了。

如果丙氨酸是需要控制的杂质，
1、有其他方法进行控制，那液相有关物质检查这项就可以不包括它，不必积分
2、没有其他方法控制，就需调整流动相比例（增加水的比例），使其跟溶剂峰分开，再积分。

请问你的空白是打一针溶剂还是直接inject?

1。进一针流动相，看看那个峰是从哪里来的？

2。那个杂质是不是你们需要控制的？如果不需要控制，那就可以不管；如果要控制，那就要重选方法了

我用的就是流动相溶的，进的空白溶剂就是流动相。

此肯定需要控制的，含量还不小，国家药典有用薄层色谱方法控制，但是小弟不大熟练那个分析方法，而且即使将此杂质分开来测，那么在检测杂质总量的时候它是无法定量的，所以它影响杂质的总量。小弟有点笨，希望老师给与指导，谢谢。

我们的空白溶剂是流动相，直接进的流动相。

1、药典上有薄层色谱的方法进行控制，但是有关物质需要知道总量，因为丙氨酸的含量无法定量，所以总量是很影响的。指导法则杂质的总量不能超过2%，而药典的对丙氨酸的控制为1%以下。
2、流动相的水和有机溶剂的比例，我调试过了，丙氨酸的峰始终在2.8-3.1之间，很让我崩溃。
希望老师指导。

[ 本帖最后由 zhangyandong4 于 2010-9-3 07:49 编辑 ]