【求助】请教小肽分离方法 - 经验共享

蛋白质与蛋白组学 » 讨论区 » 经验共享 » 【求助】请教小肽分离方法

13 2/2 ‹‹1 2

需要登录并加入本群才可以回复和发新贴

打印 | 推荐 | 订阅 | 收藏

标题:【求助】请教小肽分离方法

831226[使用道具]
四级
Rank: 4

UID 79782
精华 0
积分 770
帖子 1240
信誉分 100
可用分 6976
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-12-15
状态离线

发表于 2014-5-7 16:21 资料个人空间短消息加为好友

小中大

做过类似实验，用的是反相-HPLC，C-18柱
然后冻干浓缩，再跑Tricine-SDS-PAGE检测。

memory[使用道具]
三级
Rank: 3

UID 76531
精华 0
积分 378
帖子 436
信誉分 100
可用分 2962
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-7
状态离线

发表于 2014-5-7 16:21 资料个人空间短消息加为好友

小中大

相关疾病：
精神分裂症
1,无需无菌,
2, 先建立一个C18检测手段。
3,不要直接上预装的反相柱，因为发酵液里什么都有，即使微滤后，大分子蛋白之类的东西也会堵住，柱子很快就不行了。用自己装的是大颗粒常压，进行预处理，自己再生和重装也容易。也可以考虑G25除去大分子物质。用你的HPLC C18监测。
4,HPLC检测流出的峰，收集，旋蒸或稀释到下一步上样的浓度。再用预装柱C18精分，收集峰，OK，进行鉴定。。。

xue258[使用道具]
四级
Rank: 4

UID 75643
精华 0
积分 746
帖子 1171
信誉分 100
可用分 6696
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-10-26
状态离线

发表于 2014-5-7 16:21 资料个人空间短消息加为好友

小中大

对於细菌的抗菌小肽，常用的手段为三个步骤，第一步可用硫安沈淀（70％）再透析，或是以斥水性分离法(hydorphobic interaction, 常用的有Amberlite XAD-16). 第二步以阳离子交换管柱分离，最後用反相HPLC纯化。由於细菌的抗菌小肽的物性大都相似：小分子（2-6 kD)，带正电荷，斥水性，所以目前细菌的抗菌小肽有关的发表论文，都是以同样的程序进行纯化。
所以要纯化某物质时，若事先知道其物性，便可作以依据来设计纯化方法。

13 2/2 ‹‹1 2