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标题:【求助】SDS电泳胶不凝

DNA[使用道具]
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发表于 2014-5-20 13:31 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

APP和TEMED量或是活性，最好新配
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qqq111[使用道具]
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发表于 2014-5-20 13:32 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我们前一阵子也遇到类似情况，你们实验室如果其他人也做胶的话，可以先借点他们的TEMED和APS试试，逐一排除原因，一般都是这两种催化剂的问题。建议TEMED和APS量最好按方案加，过量虽然凝得快，但可能导致胶的不均匀凝固，影响电泳结果。
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yychen[使用道具]
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发表于 2014-5-20 13:32 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
一般胶不凝，过硫酸铵的问题最常见，过硫酸铵一定要新鲜配制，不能偷懒，之前配的最多能在4度放一周，我为了保险，每次都是新配。
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wawa[使用道具]
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发表于 2014-5-20 13:32 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

变性电泳胶不凝，首先最可能的原因就是过硫酸铵和TEMED试剂的问题，楼主应先排除这两个试剂是否出了问题，过硫酸铵一般受潮即失效，每次做电泳最好新鲜配置。
其次聚合时间与温度是有一定关系的，凝胶形成的反应过程中，需要有催化剂参加，催化剂包括引发剂过硫酸铵和加速剂TEMED，在温度低的情况下，可以适当加大以上两种物质的用量。另外还可以采用提高室温，预热配胶溶液等方法来加速胶的凝结。我们实验室的一位老专家建议采用增加光照的方法，就是用灯来照射装好胶的玻璃片效果也不错。
我曾经试过用吹风机加热，也能加速胶的凝结，不过这种方法不可取，会把胶面吹歪。
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小糖块[使用道具]
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发表于 2014-5-20 13:33 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

其实最主要的是怕AP失效，因为一旦潮解，就很难起作用。。。
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popo520[使用道具]
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发表于 2014-5-20 13:33 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

AP响也不一定能凝
能凝也不一定能凝匀。。。
总之很麻烦
师兄交代要用玻璃器皿配AP
试用有效后可分装成小份存在－20度
每次化一支 4度 一周内使用
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tangxin_80[使用道具]
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发表于 2014-5-20 13:33 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

排除法解决问题，如果方便的话，可以借用别人的（好用的），APS和丙烯酰胺，其余的用自己的，不凝的话，那就三种（包括temed）都借用别人的（哈哈，过分了啊，），还不凝的话，那就建议缓冲体系重新配，或者劳驾高手配，哈哈，要是这些都解决了，还是不凝的话，不过这个怎么可能呢！！！
抓紧，不要在凝胶这个问题上浪费太多时间！因为后面还有的忙。呵呵
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orangecake[使用道具]
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发表于 2014-5-20 13:34 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
TEMED还是不要多加的好，真的容易导致胶不均匀。可采用增加光照的方法，加热要注意胶上下温度一致的问题，我猜测还是可能你的APS出问题了。总的说来胶还是很好凝的，慢慢来，不要着急不要着急呵呵
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toy[使用道具]
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发表于 2014-5-20 13:34 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

请问楼主，你的问题现在解决了吗？找到了什么原因？我目前也遇到了同样的问题，一个星期了，一直徘徊在胶不凝上，到现在还没有找到原因。我的过硫酸氨是九三年买的，有部分潮解，但以前用的时候还可以，只是最近胶总不凝。temed是新买的，应该没有问题。所有的试剂都是用高纯水配制的。
再问一下各路高手，配试剂的水必须是双蒸水吗？我用的过滤器过滤的水，以前也是用这个，成功过，但现在我实在没有办法了。
谢谢了！
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8princess8[使用道具]
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发表于 2014-5-20 13:34 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我觉得可能是Ap的问题
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