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标题:【求助】聚丙稀酰胺凝胶电泳为什么就是跑不下去？

mickeylin[使用道具]
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发表于 2014-5-24 11:09 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】聚丙稀酰胺凝胶电泳为什么就是跑不下去？


我用聚丙稀酰胺凝胶来跑Tf可不知道为什么就是跑不下去？
分离胶（8%）：
30%聚丙稀酰胺：10.00ml
ddH2O： 17.8ml
Tris-HCl(PH8.8): 9.4ml
10%过硫酸铵： 0.4ml
TEMED: 0.002ml
浓缩胶用150V跑1.5h，分离胶用250V跑了10h才跑到胶的一半，就跑不下去了，Why?哪位好心的高人指点一下吧，我都快晕了。在这先谢谢了。
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flower-201[使用道具]
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发表于 2014-5-24 11:09 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

你看看整个系统是不是一个很畅通的电流回路．
例如：胶条撕掉了吗．
　　　胶板上面有没有在完全在缓冲液中
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发表于 2014-5-24 11:09 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

个人认为你跑胶用的缓冲液有问题，建议重配，并且配胶所用的液体液重新检查一遍
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发表于 2014-5-24 11:10 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
再看看你的电泳仪是否受功率设置的限制,这样即使你电压那么大,但后来电流会越来越小.另外,检查一下缓冲液的pH值.
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yueban-1147[使用道具]
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发表于 2014-5-24 11:10 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

可能是电极缓冲液的问题吧。是不是电极缓冲液中的离子浓度太低了？你有没有配错？
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987789[使用道具]
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发表于 2014-5-24 11:11 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
看一下你电泳时电流是多少（一般200v在50mA左右），10×电泳buffer是不是时间长了，重新配新鲜的
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mickeylin[使用道具]
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发表于 2014-5-24 11:11 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我已经重新配过了所有的溶液，电极缓冲液则是用一次重新配一次．不过的确是电压那么大,但后来电流会越来越小且功率也跟着变小，但功率也就是十来瓦，远远小于最大功率啊，应该不会有限制吧，电泳时电流一般在２０多左右．昨天我把Ｔris-HCl换成了Tris-柠檬酸，３－４小时是跑完了，可完全没有条带出来，Ｔris-HCl虽然很难跑下去但起码它的条带还能出来啊，郁闷死我了！请各位指点指点！谢啦！
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yjf1026[使用道具]
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发表于 2014-5-24 11:11 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我也碰到过这样问题,电阻太大,样品跑不下去,或跑成拱形,最后还是停下重跑.最后把所有液体重新换过才跑出漂亮的图来.
要重新配制溶液,确定没有错,
另外把样品分几次跑,
实验室别的人跑有没有问题
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lixi559[使用道具]
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发表于 2014-5-24 11:12 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
你的胶是新制的吗？？？
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mimili_901[使用道具]
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发表于 2014-5-24 11:12 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

估计还是缓冲液出问题了,缓冲能力不够,到后来就缓冲不动了,你改用恒流,这样电泳仪会提高电压以保证你设置的电流,但最后还是换体系
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