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标题:【求助】蛋白超生破碎产生大量气泡

麦茶tea[使用道具]
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【求助】蛋白超生破碎产生大量气泡


大家好,最近做蛋白原核表达,表达后有特异蛋白带,菌体超声波破碎后产生大量气泡,几乎刚刚开始破碎无法进行下去,使破碎很不完全,并且溶菌酶处理后还是破碎不好。为什么会产生大量泡沫,是因为蛋白变性吗,目的蛋白是用pet表达的,后带有his标签,应该是包含体形式。以前也做过其他重组菌株的,并不会这样啊,请教各位帮忙想个办法,怎样才能很好的破碎啊。
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bring[使用道具]
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避免气泡的产生,我一般采用口径相对比较大的容器盛放菌液,400W的功率处理一般不会出现多少气泡.一旦出现气泡我建议你还是将气泡滤掉,再重新破碎为宜.
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mimili_901[使用道具]
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我做过真核超声破碎,一般将探头放在液面以下,然后再start,就不会有太多气泡。
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duoduo[使用道具]
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大家好,最近做蛋白原核表达,表达后有特异蛋白带,菌体超声波破碎后产生大量气泡,几乎刚刚开始破碎无法进行下去,使破碎很不完全,并且溶菌酶处理后还是破碎不好。为什么会产生大量泡沫,是因为蛋白变性吗,目的蛋白是用pet表达的,后带有his标签,应该是包含体形式。以前也做过其他重组菌株的,并不会这样啊,请教各位帮忙想个办法,怎样才能很好的破碎啊。

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产生气泡的主要原因是探头位置没有放好,和蛋白没有太直接的关系。
一般探头不要浸没液面太多,比如50-100ml的烧杯中超声,在0.5~1cm深度内
放置蛋白的样品溶液体积比较多的时候,容器口径大一点,浅一点更好。最好不要直接再离心管中超声
超声过程中,如果出现声音刺耳的时候,要立即停止,否则会损坏超声探头。
如果液体产生气泡,要先吸出所有泡沫再重新超声,否则泡沫会越来越多。
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plaa[使用道具]
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超声千万不能起泡,起泡的话,蛋白马上变性.超声时,先用少量菌体把超声条件(超声电压和时间)摸索好.探头伸入液面1/3处,不能贴壁.每次超声时间也不宜过长.
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bamboo16[使用道具]
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我们破碎的时候加PMSF(异丙醇作溶剂).既可以抑制蛋白酶活性,又有消泡的作用.
再就是,探头一定要插正,不能碰壁.否则就很容易出现气泡.
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vcve[使用道具]
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如果使用1.5ml tube破碎,最适体积是200μl,一定要把探头插入液面以下,否则就会产生气泡,产生气泡后蛋白就会失活,不是说因为蛋白失活才导致产生气泡.
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tuuu2[使用道具]
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我一般超声的功率在100W左右,温度在25度左右,气泡不会产生,超声时间可以多一点.
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jkobn[使用道具]
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降低功率,直到不产生气泡为止!
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lxh031[使用道具]
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和探头的位置有很大关系,最好在液面下二分之一处。我裂解蛋白时刚开始也老出现气泡,调整探头位置后再没有出现过,祝你好运!
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