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刚刚查了些资料,发现要表达的序列有比较多的连续的稀有密码子,而表达宿主菌BL21(DE3)没有Rosetta-gami(DE3)那样可以提供稀有密码子tRNAs,所以现在初步怀疑是由于这个原因造成的不表达,觉得现在我好像有两个选择,一是更换载体和宿主菌,用比较稳定的pet32a/Rosetta-gami(DE3)来重新表达;二是不换载体,换一种可以表达稀有密码子的宿主菌如Rosetta-gami(DE3),但是pet28a是kan抗性,Rosetta-gami(DE3)含有tet,kan,cam抗性,没有抗性标记,可不可以在pet28a载体上加一个amp的抗性,或者消除掉Rosetta-gami(DE3)的kan抗性标记?有没有人做过相关的这样的工作,能不能给点建议?等待结果中。。。