小中大【求助】做WB遇见特奇怪的难题!
我做WB快两年了,以前一直都很好,跑出来的条带都很亲清晰,不过最近的结果太差了,找了好久的原因也没找到,请有经验的不吝赐教:
我以前用的是25mM Tris,192mM glycine,20%甲醇,100V转膜80分钟,一直结果都不错,87KD的蛋白Marker很清晰
可是最近突然就不清晰了,而且是高分子量的和低分子量的同时不清晰(甚至没有条带);
我换了电转槽,还是不行,后来我改成横流90mA分别跑了3个小时和5个小时,结果小分子量的还可以,87KD的和以前相比差很多,而且3个小时和5个小时的结果没有太大的差别,应该不是时间不够;
我又跑了140mA的条件,结果没有什么改变,还是不行;
后来我改用48mM Tris,39mM glycine,20%甲醇试了不同的电流和时间,87KD的效果还是和以前相差很多;
附:前段时间出现过一次这样的事情,因为原来用的是25mM Tris,192mM glycine,10%的甲醇,后来把甲醇的含量提高到20%后结果明显变好了,可是刚过一个月又不行了,还是高低分子量都不好。
问题是:到底是哪里出了错呢?做了好几年了,为什么现在就不行了呢,以前一直都很好啊。
请大家不吝赐教!多谢!