【求助】请教凝胶柱纯化为什么只有一个峰

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标题:【求助】请教凝胶柱纯化为什么只有一个峰

ffaa[使用道具]
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发表于 2014-6-4 16:07 资料个人空间短消息加为好友

小中大

最近作凝胶柱纯化发现只有一个峰，怎样才能分离开同时收率高啊

am10[使用道具]
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发表于 2014-6-4 16:07 资料个人空间短消息加为好友

小中大

你用的是什么柱子，要纯化什么蛋白，用什么缓冲液，要说清楚一些，否则别人也没法帮你解决。

jkobn[使用道具]
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发表于 2014-6-4 16:08 资料个人空间短消息加为好友

小中大

建议如下：
1 ：可以将你的样品跑电泳，普通的PAGE就可以，粗步看看蛋白的分子量范围，这样心中有数。
2 ：根据的分子量范围选择合适的凝胶进行分离，比如：sephadexG75 的分离范围是3-70KD，sephadexG30的分离范围是0.3-10KD。
3 ：收率高？凝胶层析的缺点就是样品稀释了很多倍，过柱子之后，蛋白的浓度往往下降10倍左右，这样就需要加大样品的浓度，我一般都把样品的浓度加大很多，这样得到的活性峰浓度才能达到毫克级。

ffaa[使用道具]
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发表于 2014-6-4 16:08 资料个人空间短消息加为好友

小中大

谢谢大家帮忙，我得意思是凝胶柱分离得时候是根据蛋白大小分离得，蛋白从大到小依次流出，按理说应该有不同得峰，为什么我做下来只有一个峰，这样子就没有办法选择在哪个出峰得时候收集目标样品啊

abc816[使用道具]
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发表于 2014-6-4 16:08 资料个人空间短消息加为好友

小中大

搂住你是做科研的么？

ffaa[使用道具]
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发表于 2014-6-4 16:09 资料个人空间短消息加为好友

小中大

我得蛋白分子量是19，用的是最大分子量为30的凝胶柱，请问70－80的蛋白能够除去吗

ffaa[使用道具]
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发表于 2014-6-4 16:09 资料个人空间短消息加为好友

小中大

再想请教一下，我得蛋白是19，杂蛋白是35以上，请问应该选择什么分子量范围的凝胶柱才能分开，谢谢

PINK[使用道具]
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发表于 2014-6-4 16:09 资料个人空间短消息加为好友

小中大

QUOTE:

原帖由 ffaa 于 2014-6-4 16:09 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

再想请教一下，我得蛋白是19，杂蛋白是35以上，请问应该选择什么分子量范围的凝胶柱才能分开，谢谢

如果是手动装柱的话，sephadex G50 的正合适，G50分离范围是1500-30000，刚好你的杂蛋白都走外水了，按你说的那个分子量应该很容易分
如果用预装柱，选Superdex 75，也应该很容易分开，你的那个分子量很容易用分子筛分开的。
上分子筛的时候注意点，上样是床体积的5%以内，流速慢一点，柱子装细长的就行了。

831226[使用道具]
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发表于 2014-6-4 16:10 资料个人空间短消息加为好友

小中大

3 ：收率高？凝胶层析的缺点就是样品稀释了很多倍，过柱子之后，蛋白的浓度往往下降10倍左右，这样就需要加大样品的浓度，我一般都把样品的浓度加大很多，这样得到的活性峰浓度才能达到毫克级。
回收率那么低吗？