蛋白质与蛋白组学 » 讨论区 » 经验共享 » 【求助】电泳所需蛋白质量

采购询价

点击提交代表您同意 《用户服务协议》 《隐私政策》

 13  1/2 12››
 
需要登录并加入本群才可以回复和发新贴
打印 | 推荐 | 订阅 | 收藏

标题:【求助】电泳所需蛋白质量

dmg[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 74197
精华 0
积分 315
帖子 330
信誉分 100
可用分 2457
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-10-8
状态 离线
1

发表于 2014-6-4 16:12 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】电泳所需蛋白质量

我的蛋白质样品里只有2ul的蛋白质 请问这种情况下可以做电泳吗？
顶部
daod[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 76758
精华 0
积分 585
帖子 790
信誉分 100
可用分 4891
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-9
状态 离线
2

发表于 2014-6-4 16:12 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


QUOTE:
原帖由 dmg 于 2014-6-4 16:12 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
我的蛋白质样品里只有2ul的蛋白质 请问这种情况下可以做电泳吗？

太少了　
顶部
dmg[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 74197
精华 0
积分 315
帖子 330
信誉分 100
可用分 2457
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-10-8
状态 离线
3

发表于 2014-6-4 16:13 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


QUOTE:
原帖由 daod 于 2014-6-4 16:12 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')


太少了　


那最少应该多少呢？
我现在是按20ul的量加，能不能在SDS-PAGE的时候用30ul的量呢？
顶部
兔唇[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 79677
精华 0
积分 224
帖子 187
信誉分 100
可用分 1676
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-12-14
状态 离线
4

发表于 2014-6-4 16:13 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

可以加30µL，
我一般用的是质量，而不是体积，建议采用每个加样孔应该有蛋白质20µg左右，体积应该低于40µL
祝好运
顶部
dmg[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 74197
精华 0
积分 315
帖子 330
信誉分 100
可用分 2457
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-10-8
状态 离线
5

发表于 2014-6-4 16:13 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

谢谢楼上 我又算了一下 最多只有10ug左右 我用的抗体是IkB 这个抗体还算敏感吧
顶部
wu11998866[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 73743
精华 0
积分 569
帖子 797
信誉分 100
可用分 4850
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-9-27
状态 离线
6

发表于 2014-6-4 16:14 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

上样量和你制的胶及电泳槽相关。一般用六一的Mini槽1cm的板的话加20ul比较合适，如果用大槽子和厚玻璃板的话可以增大上样量，具体量你可以提前试一下。蛋白质的量你能大致估计一下目的蛋白能有多少吗？不过如果你做Western的话，我觉得在量上不会太严格了，因为考染染不出来的情况也可能在ECL的时候看出来的，WB的灵敏度还是很高的。我们这边有过类似情况，目的蛋白的量很少，胶跑完后考染看不到，但是做玩WB后压片子出来结果很清晰的。这种情况下蛋白量反而不能太高。总之你自己试一下摸索一下条件，很easy的。祝好运。
顶部
3648755[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 77481
精华 0
积分 574
帖子 767
信誉分 100
可用分 4731
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-17
状态 离线
7

发表于 2014-6-4 16:14 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

一般上样量在12-15ug最好，正如kakeey 兄所说的，上样量看的是质量，而不是体积
顶部
zsxan1990[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 76272
精华 0
积分 442
帖子 604
信誉分 100
可用分 3776
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-3
状态 离线
8

发表于 2014-6-4 16:15 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我看分子克隆上说中等大小分子量的蛋白的Westerm 检出下限是1-5ng，按照含量为10的五次方分之一算的话，上样的总蛋白量最低应该是100ug呀？但是我也看到有前辈的资料说上样量不能查过50ug，所以一直不明白到底是怎么回事？
谢谢指点迷津！
顶部
yysr238[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 79378
精华 0
积分 400
帖子 480
信誉分 100
可用分 3233
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-12-10
状态 离线
9

发表于 2014-6-4 16:15 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

一般上样5－10ug，推荐10ug。也就是说，假如你的蛋白是1mg/ml的话，上10ul足已。
顶部
IAM007[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 75217
精华 0
积分 464
帖子 608
信誉分 100
可用分 3861
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-10-20
状态 离线
10

发表于 2014-6-4 16:15 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

每空的上样量不可以超过20ug，但是如果上样量太少的话SDS－PAGE可能不会显示出明显的条带。
顶部
 13  1/2 12››