【求助】能否进行质谱分析？

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标题:【求助】能否进行质谱分析？

zhihui小新[使用道具]
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发表于 2014-6-4 16:42 资料个人空间短消息加为好友

小中大

我想请问一下，经过SDS－PAGE后回收的蛋白能直接进行质谱分析吗？
如果不能还需要做什么呢？
初次接触这方面，请大家指点！

mamamiya[使用道具]
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发表于 2014-6-4 16:43 资料个人空间短消息加为好友

小中大

你是怎么回收的呢，一般不行，如果是多肽可以，对于蛋白可以进行胶内酶解就行

xyw5[使用道具]
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发表于 2014-6-4 16:43 资料个人空间短消息加为好友

小中大

直接不行
需进行in solution digestion

jujuba[使用道具]
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发表于 2014-6-4 16:43 资料个人空间短消息加为好友

小中大

SDS-PAGE挖胶直接做 PMF分析的情况我做过,能够成功与否主要是看在该分子量处有没有其他蛋白的影响,量的大小如何. 如果你想要的蛋白占了该条带的主要成分的话,那即使有些其他低峰度蛋白影响也可以分析出来.
关键是检索的时候鉴定的成功率.
但是,该种方法在高水平的文章中不建议采用,毕竟不是很严谨.

xyw5[使用道具]
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发表于 2014-6-4 16:44 资料个人空间短消息加为好友

小中大

QUOTE:

原帖由 jujuba 于 2014-6-4 16:43 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

SDS-PAGE挖胶直接做 PMF分析的情况我做过,能够成功与否主要是看在该分子量处有没有其他蛋白的影响,量的大小如何. 如果你想要的蛋白占了该条带的主要成分的话,那即使有些其他低峰度蛋白影响也可以分析出来.
关键是 ...

挖胶直接做 PMF分析?
莫磋人吧？
还是要靠trypsin吧？

jujuba[使用道具]
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发表于 2014-6-4 16:44 资料个人空间短消息加为好友

小中大

QUOTE:

原帖由 xyw5 于 2014-6-4 16:44 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

挖胶直接做 PMF分析?
莫磋人吧？
还是要靠trypsin吧？

当然是要经过 trypsin digest , 我指的是没有经过进一步的双向电泳分离或分离纯化 Smile

zhihui小新[使用道具]
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发表于 2014-6-4 16:45 资料个人空间短消息加为好友

小中大

谢谢大家的指点！
我还有个问题：用蛋白质纯化仪纯化后得到的蛋白能直接用于质谱分析吗？

DONT[使用道具]
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发表于 2014-6-4 16:45 资料个人空间短消息加为好友

小中大

第一个问题:
你没必要回收,直接从胶上切下你的目的蛋白条带,做胶内胰酶酶解后就可以做质谱分析,最好做串联分析,因为你切下的条带可能不止一种蛋白质,这样只做PMF是不行的,当然你可以选择MALDI_TOF_TOF也可以实现;当然回收后的蛋白也可以酶解后进行以上的质谱分析.
第二个问题:
纯化后的蛋白质当然可以质谱分析了,纯度越高越好.不纯的用串联质谱分析也是没问题的.

zhihui小新[使用道具]
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发表于 2014-6-4 16:46 资料个人空间短消息加为好友

小中大